gik du glip af Dr. Philip Dubé”s seneste webinar, Den Vigtigste Mus i Verden – Din Guide til C57BL/6 Mus? Hans præsentation undersøgt den genetiske mangfoldighed blandt C57BL/6 substrains, konsekvenserne for PERLE modeller, og nytten af C57BL/6 mus i studier af metabolisme, immunologi, onkologi og adfærd.
På grund af tidsbegrænsninger, mange af de spørgsmål forskere indsendt til hans
Q: Hvor mange forskellige C57BL/6 substrains tilbyder Taconic Biosciences i øjeblikket?
Dr. Philip Dubé (PD): Taconic tilbyder to forskellige C57BL/6 substrains, C57BL/6NTac og C57BL/6JBomTac.
-
Q: Er C57BL/6NTac det samme som C57BL/6NJ fra Jackson Laboratory?
PD: Taconic”s C57BL/6NTac er genetisk ens, men ikke identisk med C57BL/6NJ stammen.
begge er afledt af C57BL/6N-embryoner, når de først er opretholdt ved National Institutes of Health (NIH) Dyregenetisk ressource., Taconic modtog denne stamme i 1991, og Jackson-laboratoriet modtog deres i 1997.
Taconic opretholder den genetiske stabilitet af alle indavlede musestammer gennem kryopræservering, hvilket sikrer, at C57BL/6NTac er så ligner som muligt den originale C57BL/6N-linje opretholdt ved NIH.
-
Q: Hvor vigtig er genetisk baggrund i forhold til mikrobiomprofil?
PD: genetiske variationer mellem C57BL / 6 understamme bidrager til flere fænotypiske forskelle., Imidlertid kan mikrobiomet have en lige så vigtig rolle i bestemmelsen af flere egenskaber ved en musestamme, især immun-og metabolisk funktion.
Mus, der stammer fra forskellige leverandører, eller endda fra forskellige placeringer fra den samme leverandør, kan have meget forskellige mikrobiomprofiler. Specifikke eksempler på kendte kommensale mikroorganismer med funktionelle virkninger inkluderer segmenterede filamentøse bakterier (SFB) og Lactobacillus reuteri1,2.
-
Q: Hvor ofte skal vi backcross vores koloni for at undgå genetisk drift?,
PD: hvis du opretholder en koloni af vildtype C57BL / 6 mus, anbefaler vi generelt at erstatte den med frisk bestand mindst hver fjerde generation. Hvis du bruger en koloni af genetisk manipulerede mus på en defineret C57BL/6 baggrund, overveje backcrossing hver fjerde til ti generationer.
da en generation af backcrossing kun erstatter halvdelen af genomet, anbefales det at gøre dette oftere snarere end mindre.
når backcrossing, være omhyggelig med at bruge en defineret indavlet bestand, der er identisk med baggrunden for din linje., Brug af en upassende C57BL / 6-understation kan påvirke fremtidige studier3, 4.
Hvis du er usikker på den genetiske baggrund for din linje, skal SNP-test udføres (se nedenfor). En bedre mulighed er at kryokonservere embryoner (eller sædceller) fra din linje og helt erstatte det med rederived dyr hver tiende generation. En ekstra fordel ved dette er sikkerheden ved at have en sikkerhedskopi til din koloni i tilfælde af uforudsete omstændigheder (sygdom, utilsigtet mismating, facilitetsproblemer, naturkatastrofer osv.).
-
Q: Hvad er eksperimentelle tilgange til at verificere understationen?,
PD: Single nukleotid polymorfisme (SNP) panel test er en enkel og økonomisk måde at bestemme den genetiske baggrund af musen stammer.
Substrain baggrund kan nemt identificeres ved hjælp af en SNP-panel designet til at differentiere C57BL/6 stammer, såsom Mus B6 SNP-Panel fra Taconic (halvfems-seks SNPs i alt). Dette panel indeholder fireoghalvfems SNP ‘ er, der adskiller sig mellem C57BL/6NTac og C57BL/6J substrains.,
dette panel er dog mindre følsomt over for forskelle inden for C57BL/6N understrækninger, og omfatter kun to SNP ‘ er, der adskiller C57BL/6NJ fra andre C57BL/6N understrækninger. Før du bruger en målrettet C57BL/6 SNP-panel, skal du bekræfte, at din stamme er på en ren C57BL/6 baggrund og ikke har genetisk forurening fra andre stammer (fx 129S6/Sv, FVB eller BALB/c). Samlet stamme sammensætning kan bestemmes ved hjælp af mere omfattende SNP paneler.
-
Q: Hvordan kan du bestemme, hvilke gen(er) der forårsager fænotypiske forskelle mellem forskellige C57BL/6 substrains?,
PD: koblingsanalyse af genetiske krydsninger mellem forskellige C57BL/6 substrains, i kombination med SNP-arrays og hel-genom-sekventering, kan hjælpe til at identificere formodede forårsagende gener for en bestemt fænotype. Denne tilgang er udfordrende, men i betragtning af det begrænsede antal markører for koblingsanalyse mellem C57BL/6 understrækninger.
bekræftelse af de funktionelle konsekvenser for en genetisk variant ville formelt kræve målrettet genredigering på en defineret genetisk baggrund., For eksempel blev afvigende B-celleudvikling i C57BL/6NHsd-understationen tilskrevet Dock2m1Hsd-varianten på denne måde3. Der skal udvises forsigtighed for at udelukke ikke-genetiske faktorer for forskelle mellem stammer, såsom mikrobiompåvirkninger.
Se Taconic Biosciences” Webinar:
- De Vigtigste Mus i Verden – Din Guide til C57BL/6 Mus
-
Q: Hvordan køn påvirker undersøgelsens resultater i C57BL/6 mus?
PD: køn kan have stor indflydelse., Bortset fra åbenlyse kropsvægt og hormonelle forskelle har C57BL/6 mænd forskellige adfærdsmæssige og metaboliske egenskaber sammenlignet med C57BL/6 kvinder.
køn bør altid overvejes i studiedesign. Køn er en vigtig biologisk variabel, og valget af køn(er), der skal medtages i undersøgelser, bør være videnskabeligt forsvarligt. For eksempel kræver NIH fra 2015 begrundelse for valg af køn i alle støtteansøgninger, der involverer dyr i biomedicinsk forskning.
-
Q: Hvordan kan du reducere aggression og kampadfærd hos mandlige C57BL/6 mus?,
PD: C57BL / 6 mænd kan blive mere og mere aggressive, når de bliver ældre, eller når de udsættes for stressede situationer. C57BL / 6 hanner er hierarkiske, og en dominerende mand kan opstå i bur med flere mus. Når Co-huse med andre mænd fra en ung alder, eller som kuldkammerater, chancerne for aggression minimeres.
Det anbefales ikke at co-house post-pubertal C57BL/6 mænd med andre ukendte mænd. Stud hanner bør aldrig være opstaldet med nogen anden mand, og flere hanner bør aldrig være opstaldet med nogen kvinde(s).,
stressfremkaldende situationer (procedurer, ukendte plejere, sygdom osv.) vil have tendens til at øge sandsynligheden for aggression. Tilvejebringelse af berigelsesanordninger kan reducere aggressiv adfærd; disse inkluderer hekkemateriale, hyrdehytter, tyggepinde, rør osv.
-
Q: Hvorfor udvikler C57BL / 6 mus ulcerøs dermatitis, og hvordan kan det forhindres og / eller behandles?
PD: alle C57BL / 6 understamme er tilbøjelige til at udvikle dermatitis. Selvom en genetisk årsag er ukendt, er der en stærk miljøkomponent til dette.,
dermatitis incidens kan minimeres ved at opretholde et stabilt miljø med konstant temperatur og relativ fugtighed mellem 30% og 70%.
når dermatitis præsenterer, har dette historisk været vanskeligt at behandle. En ny og meget effektiv styringsmulighed er imidlertid at klippe de bageste tånegle af de berørte mus for at forhindre ridser og forværring af tilstanden, mens den heler1. Aktuelle salver og antibiotika kan også hjælpe med at forhindre infektion under heling, men er generelt ikke effektive alene.,
-
Q: ville en opdrætterdiæt, såsom Purina 5015 cho?, forårsage, at C57BL/6NTac-mus bliver overvægtige og viser metabolisk syndrom?
PD: højenergi opdrætter kost er formuleret med øget fedt til støtte for post-partum og kontinuerligt opdræt hunner. Typisk har disse omkring 11% fedt efter vægt sammenlignet med 5-6% i standard cho .s.
C57BL/6NTac-mus er tilbøjelige til at udvikle diætinduceret fedme og insulinresistens, når de fodres med en diæt med højt fedtindhold. Øget fedthed, når den opretholdes på en 11% fedtdiæt, ville ikke være overraskende.
Taconic”s standard Cho.er NIH 31M formlen.,
-
Q: er der en enkel måde at vælge en specifik C57BL/6 understamme til brug for metaboliske undersøgelser?
PD: C57BL / 6N substrains anbefales ofte til metaboliske undersøgelser; der er dog ingen enkel måde at vælge den bedste til en bestemt applikation.
udførelsen af en mus i en metabolisk undersøgelse afhænger ikke kun af genetiske faktorer, men også dens iboende mikrobiomprofil. Den mikrobiome af en mus vil variere baseret på dens oprindelse og dyrehold protokoller.,
den bedste anbefaling er at vælge en optimal model baseret på valideringsundersøgelser, med en bestemt understamme hentet fra et specifikt sted.
-
Q: Hvor godt virker C57BL / 6 mus til stressinducerende protokoller?
PD: C57BL / 6 mus reagerer generelt på stress forskelligt fra andre stammer. Selvom der sandsynligvis er forskelle i understamme, er disse ikke veldefinerede.
i modsætning til mere stress-udsatte stammer, såsom BALB/C og 129S6/Sv, præsenterer C57BL/6 mere metaboliske end adfærdsforstyrrelser som reaktion på stressorer.,
køn og døgnrytmer er sandsynligvis også vigtige faktorer ud over socialisering og andre miljøpåvirkninger. Kroniske stressprotokoller valideret for C57BL / 6 mus er blevet publiceret6.
-
Q: Hvilke faktorer forårsager variation i væksten af tumorer implanteret i C57BL/6 mus?
PD: der er mange faktorer, der kan påvirke væksten af implanterede tumorer.,
selvom det samme antal celler implanteres (og de har samme levedygtighed), kan den nøjagtige placering af transplantatet og efterfølgende perfusion have drastiske virkninger på tumorvæksthastigheden. For eksempel kan tumorvæksthastighed variere med en faktor på fire afhængigt af om den implanteres mere anteriorly eller posteriorly7.
den nøjagtige placering af subkutane transplantater bør overvejes og kontrolleres i undersøgelser. Dyrets alder og startvægt kan også påvirke tumorvækst — jeg vil anbefale at bestille mus efter vægt for at normalisere dette., Forskere bør også bestille mus fra et enkelt sted for at minimere effekter fra mikrobiomforskelle.
endelig er mus socialt hierarkiske, og underordnede individer kan have forskellige niveauer af stress, der kan påvirke immunresponser og tumorvækst. Miljøberigelse og passende akklimatiserings-og opdrætsforhold (håndtering, lys, støj osv.)) kan bidrage til at minimere stress, især hos mænd.,
Se Taconic Biosciences” Webinar:
- De Vigtigste Mus i Verden – Din Guide til C57BL/6 Mus
Download Taconic Biosciences” hvidbog:
- Katastrofe-Beredskab: Valg og Elementer at Overveje, Når du Vælger Linjer til Cryopreserve