¿se ha perdido el reciente webinar del Dr. Philip Dubé, el ratón más importante del mundo – Su guía para el ratón C57BL/6? Su presentación exploró la diversidad genética entre los sustratos C57BL / 6, las implicaciones para los modelos de GEM y la utilidad del ratón C57BL/6 En estudios de metabolismo, inmunología, oncología y comportamiento.debido a las limitaciones de tiempo, muchas de las preguntas que los investigadores enviaron a su sesión Q&quedaron sin respuesta., Estas son todas las preguntas a las que no pudimos llegar:
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p: ¿cuántos sustratos C57BL / 6 Diferentes ofrece Taconic Biosciences actualmente?
Dr. Philip Dubé (PD): Taconic ofrece dos sustratos C57BL/6 diferentes, C57BL/6ntac y C57BL/6jbomtac.
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p: ¿ES C57BL / 6NTac lo mismo que C57BL / 6NJ del laboratorio Jackson?
PD: Taconic » s C57BL/6NTac es genéticamente similar, pero no idéntica a la cepa C57BL / 6NJ.ambos se derivan de embriones C57BL / 6N, una vez mantenidos en el National Institutes of Health (NIH) Animal Genetic Resource., Taconic recibió esta cepa en 1991, y el laboratorio Jackson recibió la suya en 1997.Taconic mantiene la estabilidad genética de todas las cepas endogámicas de ratón a través de la criopreservación, asegurando que C57BL / 6NTac sea lo más similar posible a la línea C57BL/6n original mantenida en los NIH.
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p: ¿Qué tan importante es el fondo genético en relación con el perfil del microbioma?
PD: las variaciones genéticas entre sustratos C57BL/6 contribuyen a múltiples diferencias fenotípicas., Sin embargo, el microbioma puede tener un papel igualmente importante en la determinación de múltiples características de una cepa de ratón, sobre todo la función inmune y metabólica.los ratones procedentes de diferentes proveedores, o incluso de diferentes ubicaciones del mismo proveedor, pueden tener perfiles de microbioma muy diferentes. Ejemplos específicos de microorganismos comensales conocidos con impactos funcionales incluyen bacterias filamentosas segmentadas (SFB) y Lactobacillus reuteri1,2.
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P: ¿con qué frecuencia debemos retrocruzamiento nuestra colonia para evitar la deriva genética?,
PD: si está manteniendo una colonia de ratones wildtype C57BL/6, generalmente recomendamos reemplazarla con stock fresco al menos cada cuatro generaciones. Si usa una colonia de ratones genéticamente modificados en un fondo definido de C57BL/6, considere el retrocruzamiento cada cuatro a diez generaciones.dado que una generación de retrocruzamiento solo reemplaza la mitad del genoma, se recomienda hacer esto con más frecuencia en lugar de menos.
al backcrossing, tenga cuidado de usar un stock endogámico definido que sea idéntico al fondo de su línea., El uso de un substrain C57BL/6 inadecuado puede impactar futuros estudios3, 4.si no está seguro sobre los antecedentes genéticos de su línea, se debe realizar una prueba de SNP (ver más abajo). Una mejor opción es criopreservar embriones (o espermatozoides) de su línea y reemplazarlos completamente con animales rederividos cada diez generaciones. Una ventaja añadida a esto es la seguridad de tener un respaldo para su colonia en caso de circunstancias imprevistas (enfermedad, desajuste accidental, problemas de instalaciones, desastres naturales, etc.).).
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P: ¿cuáles son los enfoques experimentales para verificar la subcepa?,
PD: la prueba de panel de polimorfismo de nucleótido único (SNP) es una forma sencilla y económica de determinar el fondo genético de sus cepas de ratón.
Subcepa el fondo pueden ser fácilmente identificados con un SNP panel diseñado para diferenciar los ratones C57BL/6 cepas, como el Ratón B6 SNP Panel de Taconic (noventa y seis SNPs en total). Este panel incluye noventa y cuatro SNP que difieren entre los sustratos C57BL/6ntac y C57BL/6j.,
sin embargo, este panel es menos sensible a las diferencias dentro de los sustratos C57BL/6n, e incluye solo dos SNPs que diferencian C57BL/6NJ de otros sustratos C57BL/6n. Antes de utilizar un panel SNP C57BL/6 específico, debe confirmar que su cepa está en un fondo C57BL/6 puro y no tiene contaminación genética de otras cepas (por ejemplo, 129S6/Sv, FVB o BALB/c). La composición general de la deformación se puede determinar utilizando paneles SNP más completos.
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p: ¿Cómo puede determinar qué gen(s) están causando diferencias fenotípicas entre diferentes sustratos de C57BL/6?,
PD: el análisis de enlace de cruces genéticos entre diferentes sustratos C57BL / 6, en combinación con matrices SNP y secuenciación del genoma completo, puede ayudar a identificar genes causativos putativos para un fenotipo dado. Sin embargo, este enfoque es desafiante, dado el número limitado de marcadores para el análisis de enlace entre sustratos C57BL/6.la confirmación de las consecuencias funcionales para una variante genética requeriría formalmente la edición de genes específicos en un fondo genético definido., Por ejemplo, el desarrollo aberrante de células B en el sustrato C57BL/6NHsd se atribuyó a la variante Dock2m1Hsd en esta manera3. Se debe tener precaución para descartar factores no genéticos para las diferencias entre cepas, como influencias del microbioma.
ver el Webinar de Taconic Biosciences:
- El Ratón más importante del mundo – Su guía para el ratón C57BL/6
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Q: Cómo afecta el género a los resultados del estudio en ¿ratones C57BL/6?
PD: El género puede tener un impacto importante., Aparte del peso corporal obvio y las diferencias hormonales, los hombres C57BL/6 tienen diferentes propiedades de comportamiento y metabólicas en comparación con las mujeres C57BL / 6.el género siempre debe ser considerado en el diseño del estudio. El género es una variable biológica importante, y la elección del género(s) a incluir en los estudios debe ser científicamente justificable. Por ejemplo, a partir de 2015, los NIH requieren una justificación para la elección del género en todas las solicitudes de subvención que involucran animales en la investigación biomédica.
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p: ¿Cómo se puede reducir la agresión y el comportamiento de lucha en ratones macho C57BL/6?,
PD: C57BL / 6 los hombres pueden volverse cada vez más agresivos a medida que envejecen o cuando están sometidos a situaciones estresantes. Los machos de C57BL / 6 son jerárquicos y un macho dominante puede surgir en jaulas con múltiples ratones. Cuando se aloja con otros machos desde una edad temprana, o como compañeros de camada, las posibilidades de agresión se reducen al mínimo.
Se recomienda no Co-alojar machos C57BL/6 post-puberales con otros machos desconocidos. Los machos de Semental nunca deben ser alojados con ningún otro macho, y los machos múltiples nunca deben ser alojados con ninguna hembra(s).,situaciones que inducen estrés(procedimientos, cuidadores desconocidos, enfermedades, etc.) tenderá a aumentar la probabilidad de agresión. Proporcionar dispositivos de enriquecimiento puede reducir los comportamientos agresivos; estos incluyen material de anidación, chozas de pastores, palitos para masticar, tubos, etc.
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p: ¿Por qué los ratones C57BL/6 desarrollan dermatitis ulcerosa y cómo se puede prevenir y/o tratar?
PD: todos los sustratos C57BL / 6 son propensos a desarrollar dermatitis. Aunque se desconoce una causa genética, hay un fuerte componente ambiental en esto.,
La incidencia de Dermatitis puede ser minimizada manteniendo un ambiente estable con temperatura constante y humedad relativa entre 30% y 70%.
Una vez que la dermatitis se presenta, esto ha sido históricamente difícil de tratar. Sin embargo, una opción de manejo nueva y muy efectiva es cortar las uñas traseras de los ratones afectados para evitar rasguños y agravamientos de la condición mientras sana1. Los ungüentos tópicos y los antibióticos también pueden ayudar a prevenir la infección durante la curación, pero generalmente no son efectivos por sí solos.,
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p: ¿una dieta de criador, como Purina 5015 chow, causaría que los ratones C57BL/6NTac se volvieran obesos y mostraran síndrome metabólico?
PD: las dietas de criadores de alta energía están formuladas con un aumento de grasa para apoyar a las hembras posparto y de cría continua. Por lo general, estos tienen alrededor del 11% de grasa en peso, en comparación con el 5-6% en los chows estándar.
Los ratones C57BL/6NTac son propensos a desarrollar obesidad inducida por la dieta y resistencia a la insulina cuando se alimentan con una dieta alta en grasas. El aumento de la adiposidad cuando se mantiene en una dieta de grasa del 11% no sería sorprendente.el chow estándar de Taconic es la fórmula NIH 31m.,
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p: ¿hay una forma sencilla de seleccionar una substrena C57BL/6 específica para usar en estudios metabólicos?
los sustratos PD: C57BL/6N a menudo se recomiendan para estudios metabólicos; sin embargo, no hay una forma sencilla de elegir el mejor para una aplicación específica.el rendimiento de un ratón en un estudio metabólico no solo dependerá de factores genéticos, sino también de su perfil microbioma inherente. El microbioma de un ratón variará en función de su origen y protocolos de cría.,
La mejor recomendación es elegir un modelo óptimo basado en los estudios de validación, con un determinado subcepa procedente de una ubicación específica.
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p: ¿Qué tan bien funcionan los ratones C57BL / 6 para los protocolos de inducción de estrés?
PD: los ratones C57BL / 6 en general responden al estrés de manera diferente a otras cepas. Si bien es probable que haya diferencias de substrain, estas no están bien definidas.en contraste con las cepas más propensas al estrés, como BALB/c y 129S6/Sv, C57BL/6 presentan más alteraciones metabólicas que conductuales en respuesta a factores estresantes.,el género y los ritmos circadianos también son probablemente factores importantes, además de la socialización y otras influencias ambientales. Se han publicado protocolos de estrés crónico validados para Ratones C57BL/66.
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Q: ¿Qué factores causan variabilidad en el crecimiento de tumores implantados en ratones C57BL/6?
PD: hay muchos factores que pueden influir en el crecimiento de los tumores implantados.,incluso si se implantan el mismo número de células (y tienen el mismo nivel de viabilidad), la colocación exacta del injerto y la perfusión posterior pueden tener impactos drásticos en la tasa de crecimiento tumoral. Por ejemplo, la tasa de crecimiento tumoral puede variar en un factor de cuatro dependiendo de si se implanta más anterior o posteriormente7.la colocación exacta de los injertos subcutáneos debe considerarse y controlarse en los estudios. La edad y el peso inicial del animal también pueden afectar el crecimiento del tumor; recomendaría Ordenar ratones por peso para normalizar esto., Los investigadores también deben ordenar ratones desde un solo lugar para minimizar los efectos de las diferencias de microbioma.finalmente, los ratones son socialmente jerárquicos, y los individuos subordinados pueden tener diferentes niveles de estrés que pueden afectar las respuestas inmunitarias y el crecimiento tumoral. Enriquecimiento ambiental y condiciones adecuadas de aclimatación y cría (manipulación, luz, ruido, etc.).) puede ayudar a minimizar el estrés, especialmente en los hombres.,
ver el Webinar de Taconic Biosciences:
- El Ratón más importante del mundo – Su guía para el ratón C57BL/6
descargue el white paper de Taconic Biosciences:
- Preparación para desastres: las opciones y elementos a considerar al seleccionar líneas para criopreservar