Oliko ikävä Tohtori Philip Dubé”s viime webinaarin, tärkein Hiiri Maailmassa – Opas C57BL/6 Hiiriä? Hänen esityksensä tutkittu geneettisen monimuotoisuuden keskuudessa C57BL/6 substrains, vaikutuksia HELMI malleja, ja hyödyllisyys C57BL/6 hiiri tutkimuksissa aineenvaihduntaa, immunologian, onkologian ja käyttäytymistä.
ajan puutteen Vuoksi, monet kysymykset tutkijat esittivät hänen Q&istunto vastattu., Tässä ovat kaikki kysymyksiä, meillä ei”t saavat:
-
K: Kuinka monta eri C57BL/6 substrains ei Taconic Biotieteiden tällä hetkellä tarjota?
Tohtori Philip Dubé (PD): Taconic tarjoaa kaksi eri C57BL/6 substrains, C57BL/6NTac ja C57BL/6JBomTac.
-
K: Onko C57BL/6NTac sama kuin C57BL/6NJ päässä Jackson Laboratory?
PD: Taconic”s C57BL/6NTac on geneettisesti samanlainen, mutta ei identtinen C57BL/6NJ rasitusta.
Molemmat ovat peräisin C57BL/6N alkiot, kun pidetään National Institutes of Health (NIH) Eläin geenivarat., Taconic sai tämän kannan, vuonna 1991, ja Jackson Laboratorio sai omansa vuonna 1997.
Taconic ylläpitää geneettistä stabiilisuutta kaikki sisäsiittoinen hiiri kantoja kautta kylmäsäilytys, varmistaa, että C57BL/6NTac on mahdollisimman samankaltainen kuin alkuperäinen C57BL/6N line voimassa NIH.
-
Q: kuinka tärkeää geneettinen tausta on suhteessa mikrobiomiprofiiliin?
PD: Geneettiset erot C57BL/6 substrains edistää useita fenotyyppisiä eroja., Kuitenkin microbiome voi olla yhtä tärkeä rooli määritettäessä useita ominaisuuksia hiiri rasitusta, erityisesti immuunijärjestelmän ja aineenvaihduntaa.
Hiiret hankitaan eri toimittajilta, tai jopa eri paikoissa samalta myyjältä, voi olla hyvin erilaisia microbiome profiilit. Erityisiä esimerkkejä tunnetuista commensal mikro-organismeista, joilla on toiminnallisia vaikutuksia, ovat segmentoidut filamenttibakteerit (SFB) ja Lactobacillus reuteri1,2.
-
Q: Kuinka usein meidän pitäisi perääntyä siirtomaamme välttääksemme geneettistä ajautumista?,
PD: Jos olet säilyttää siirtomaa wildtype C57BL/6 hiiriä, me yleensä suosittelevat korvaamalla se tuoretta varastossa vähintään joka neljä sukupolvea. Jos käytät siirtomaa geenimuunneltuja hiiriä on määritelty C57BL/6 tausta, harkitse takaisinristeytyksessä joka neljä-kymmenen sukupolvea.
koska yksi selkähuuhkajasukupolvi korvaa vain puolet perimästä, on suositeltavaa tehdä se useammin kuin harvemmin.
Kun takaisinristeytyksessä, olla varovainen käyttää määritelty sisäsiittoinen varastossa, joka on identtinen tausta linja., Epäasianmukaisen c57bl / 6-sähköaseman käyttö voi vaikuttaa tuleviin tutkimuksiin3, 4.
Jos olet epävarma sukusi geneettisestä taustasta, SNP-testi on tehtävä (KS. alla). Parempi vaihtoehto on säästää alkioita (tai siittiöitä) riviltäsi ja korvata se kokonaan uudelleensuunnatuilla eläimillä joka kymmenes sukupolvi. Lisäetu tähän on turvallisuus ottaa varmuuskopio oman yhdyskunnan odottamattomissa olosuhteissa (sairaus, tapaturma, mismating, laitos ongelmia, luonnonkatastrofit, jne.).
-
Q: Mitä ovat kokeelliset lähestymistavat sähköaseman todentamiseksi?,
PD: Yhden nukleotidin polymorfismi (SNP) paneelin testaus on yksinkertainen ja edullinen tapa määrittää geneettisen taustan hiirtä kantoja.
Substrain tausta voidaan helposti tunnistaa käyttäen SNP-paneeli on suunniteltu erottamaan C57BL/6 kantoja, kuten Hiiren B6 SNP-Paneeli Taconic (yhdeksänkymmentäkuusi SNPs yhteensä). Tämä paneeli sisältää yhdeksänkymmentäneljä SNPs, jotka eroavat välillä C57BL/6NTac ja C57BL/6J sähköasemien.,
Kuitenkin, tämä paneeli on vähemmän herkkä eroja C57BL/6N substrains, ja sisältää vain kaksi SNPs, jotka erottavat C57BL/6NJ muista C57BL/6N substrains. Ennen kuin käytät kohdennettuja C57BL/6 SNP-paneeli, sinun tulisi varmista, että kanta on puhdas C57BL/6 tausta ja ei ole geneettinen saastuminen muita kantoja (esim. 129S6/Sv, FVB tai BALB/c). Yleinen kannan koostumus voidaan määrittää kattavammilla SNP-paneeleilla.
-
Q: Miten voit määrittää, mitkä geenit aiheuttavat fenotyyppisiä eroja eri c57bl / 6-alatyyppien välillä?,
PD: Sidos analyysi geneettisen risteyttämällä eri C57BL/6 substrains, yhdessä SNP-taulukot ja koko-genomin sekvensointi, voi auttaa tunnistamaan mahdolliset aiheuttava geenejä tietyn fenotyypin. Tämä lähestymistapa on kuitenkin haastava, kun otetaan huomioon c57bl/6-ala-aineiden välisen kytkentäanalyysin vähäinen määrä.
geenimuunnoksen toiminnallisten seurausten vahvistaminen edellyttäisi muodollisesti kohdennettua geenimuokkausta määritellyllä geenitaustalla., Esimerkiksi poikkeava B-solujen kehitys c57bl / 6NHsd-sähköasemalla johtui tällä tavoin Dock2m1Hsd-muunnoksesta.3 Varovaisuutta on noudatettava sulkea pois ei-geneettisten tekijöiden väliset erot kantojen, kuten microbiome vaikutteita.
Näytä Taconic Biosciences” Webinaari:
- tärkein Hiiri Maailmassa – Opas C57BL/6 Hiirtä
-
K: Miten sukupuoli vaikuttaa tutkimuksen tuloksiin C57BL/6 hiiriä?
PD: sukupuolella voi olla suuri vaikutus., Sen lisäksi ilmeinen paino ja hormonaaliset erot, C57BL/6 miehillä on erilaisia käyttäytymiseen ja aineenvaihduntaan ominaisuuksia verrattuna C57BL / 6 naisilla.
sukupuoli tulee aina ottaa huomioon tutkimuksen suunnittelussa. Sukupuoli on tärkeä biologinen muuttuja, ja sukupuolen(Sukupuolten) valinnan tutkimuksiin olisi oltava tieteellisesti perusteltua. Esimerkiksi vuodesta 2015 lähtien NIH vaatii perusteluja sukupuolen valinnalle kaikissa biolääketieteelliseen tutkimukseen liittyvissä avustushakemuksissa, joihin osallistuu eläimiä.
-
Q:Miten aggressiivisuutta ja taistelukäyttäytymistä voi vähentää uroshiirillä C57BL / 6?,
PD: c57bl / 6 urokset saattavat ikääntyessään tai stressaavissa tilanteissa muuttua yhä aggressiivisemmiksi. C57BL/6-urokset ovat hierarkkisia ja hallitseva uros voi syntyä häkeissä, joissa on useita hiiriä. Kun asutaan yhdessä muiden urosten kanssa nuoresta iästä lähtien tai pentutovereina, aggression mahdollisuudet minimoidaan.
on suositeltavaa olla asuttamatta pubertaalin jälkeisiä c57bl / 6-uroksia yhdessä muiden tuntemattomien urosten kanssa. Uroksia ei saa koskaan majoittaa minkään muun uroksen kanssa, eikä useita uroksia saa koskaan majoittaa minkään naaraan(naaraiden) kanssa.,
stressiä aiheuttavat tilanteet (toimenpiteet, tuntemattomat hoitajat, sairaudet jne.) pyrkii lisäämään aggressiivisuuden samankaltaisuutta. Tarjoamalla rikastus laitteet voivat vähentää aggressiivista käyttäytymistä; näitä ovat pesämateriaali, paimen hökkeleissä, pureskella keppejä, putkia, jne.
-
Q: Miksi C57BL/6 hiiriä kehittää haavainen ihottuma ja miten sitä voidaan ehkäistä ja/tai hoitaa?
PD: Kaikki C57BL/6 substrains ovat alttiita kehittää ihottumaa. Vaikka geneettistä syytä ei tiedetä, siihen liittyy vahva ympäristökomponentti.,
dermatiitin ilmaantuvuus voidaan minimoida ylläpitämällä vakaata ympäristöä, jonka lämpötila ja suhteellinen kosteus ovat 30-70%.
kun dermatiitti ilmaantuu, sitä on historiallisesti ollut vaikea hoitaa. Kuitenkin, uusi ja erittäin tehokas hallinta vaihtoehto on leikata takana varpaankynnet vaikuttaa hiirillä estää naarmuuntumista ja pahenemista kuntoa kun se heals1. Ajankohtainen voiteita ja antibiootteja voi myös auttaa estämään infektion paranemisen aikana, mutta eivät yleensä ole tehokkaita yksin.,
-
K: Olisi kasvattaja ruokavalio, kuten Purina 5015 chow, koska C57BL/6NTac hiiriä tulla lihavia ja näyttö metabolinen oireyhtymä?
PD: Korkea-energia kasvattaja ruokavaliot ovat muotoiltu lisääntynyt rasvan tukea synnytyksen jälkeinen ja jatkuvasti jalostukseen narttua. Tyypillisesti näissä on noin 11 painoprosenttia rasvaa, kun tavallisissa choweissa se on 5-6 prosenttia.
C57BL/6NTac hiiret ovat alttiita kehittää ruokavalio aiheuttama lihavuus ja insuliiniresistenssi, kun ruokittu runsaasti rasvaa ruokavalioon. Lisääntynyt rasvaisuus 11% rasvaisella ruokavaliolla ei olisi yllättävää.
Taconic ” s standard chow on NIH 31m kaava.,
-
K: Onko olemassa yksinkertainen tapa valita tietyn C57BL/6 substrain käyttää aineenvaihdunnan tutkimukset?
PD: C57BL/6N substrains ovat usein suositellaan aineenvaihdunnan tutkimukset; kuitenkin, ei ole yksinkertainen tapa valita paras tietyn sovellus.
hiiren suorituskyky aineenvaihduntatutkimuksessa riippuu geneettisten tekijöiden lisäksi myös sen luontaisesta mikrobiomiprofiilista. Hiiren mikrobiomi vaihtelee sen alkuperän ja hoitoprotokollien mukaan.,
paras suositus on valita validointitutkimuksiin perustuva optimaalinen malli, jossa tietty sähköasema hankitaan tietystä paikasta.
-
Q: kuinka hyvin c57bl/6-hiiret toimivat stressiin indusoivien protokollien suhteen?
PD: C57BL/6 hiiriä yleensä reagoida stressiin eri tavalla kuin muut kannat. Vaikka sähköasemien väliset erot ovat todennäköisiä, ne eivät ole tarkkaan määriteltyjä.
toisin kuin enemmän stressi-altis kannat, kuten BALB/c ja 129S6/Sv, C57BL/6 esittää enemmän aineenvaihduntaa kuin käyttäytymisen häiriöt vastauksena stressitekijöitä.,
myös sukupuoli-ja vuorokausirytmit ovat todennäköisesti tärkeitä tekijöitä sosiaalistumisen ja muiden ympäristövaikutusten lisäksi. C57bl / 6-hiirille Validoidut krooniset stressiprotokollat on julkaistu.6
-
Q: Mitkä tekijät aiheuttavat vaihtelua kasvainten kasvua istutettu C57BL/6 hiiriä?
PD: On monia tekijöitä, jotka voivat vaikuttaa kasvuun istutettu kasvaimia.,
Vaikka sama määrä soluja istutetaan (ja ne ovat samalla tasolla kannattavuus), tarkka sijoitus siirteen ja myöhemmin perfuusio voi olla radikaaleja vaikutuksia kasvaimen kasvunopeus. Esimerkiksi kasvaimen kasvunopeus voi vaihdella kertoimella neljä riippuen siitä, istutetaanko se enemmän valtimoon vai posteriorly7.
ihonalaisten siirteiden tarkkaa sijoittelua tulee harkita ja kontrolloida tutkimuksissa. Eläimen ikä ja lähtöpaino voivat vaikuttaa myös kasvaimen kasvuun — suosittelen määräämään hiiriä painon mukaan normalisoimaan tämän., Tutkijoiden tulisi myös tilata hiiriä yhdestä paikasta minimoidakseen mikrobiomierojen vaikutukset.
Lopuksi, hiiret ovat sosiaalisesti hierarkkisia, ja alistaa yksilöt voivat olla eri stressiä, joka voi vaikuttaa immuunivasteeseen ja kasvaimen kasvua. Ympäristövirikkeet, ja asianmukainen mukautuminen ja kotieläintuotannon ehdot (käsittely, valoa, ääntä, jne.) voi auttaa minimoimaan stressiä, erityisesti miehillä.,
Näytä Taconic Biosciences” Webinaari:
- tärkein Hiiri Maailmassa – Opas C57BL/6 Hiirtä
Lataa Taconic Biosciences” Valkoinen Kirja:
- katastrofivalmiuden: Valintoja ja Tekijöitä, Harkitsemaan, Kun Valitset Linjat Cryopreserve