gikk du glipp av Dr. Philip Dubé»s siste webinar, De Viktigste Mus i Verden – Din Guide til C57BL/6 Mus? Hans presentasjon utforsket genetisk mangfold blant C57BL/6 substrains, følgene for GEM-modeller, og nytten av C57BL/6 mus i studier av metabolisme, immunologi, onkologi og atferd.
på Grunn av tidsbegrensninger, har mange av spørsmålene forskere sendt til hans Q&En økt ubesvart., Her er alle spørsmål vi kan»t få til:
-
Q: Hvor mange forskjellige C57BL/6 substrains gjør Taconic Biovitenskap tilbyr i dag?
Dr. Philip Dubé (PD): Taconic tilbyr to ulike C57BL/6 substrains, C57BL/6NTac og C57BL/6JBomTac.
-
Q: Er C57BL/6NTac det samme som C57BL/6NJ fra Jackson Laboratoriet?
PD: Taconic»s C57BL/6NTac er genetisk like, men ikke identiske til C57BL/6NJ belastning.
Begge er avledet fra C57BL/6N embryo, når opprettholdt ved National Institutes of Health (NIH) Dyr Genetisk Ressurs., Taconic mottatt denne belastningen i 1991, og Jackson Laboratoriet har mottatt deres i 1997.
Taconic opprettholder genetisk stabilitet av alle innavlet musen stammer gjennom oocytter, slik at C57BL/6NTac er så likt som mulig til den opprinnelige C57BL/6N linje opprettholdes på NIH.
-
Q: Hvor viktig er genetisk bakgrunn i forhold til microbiome profil?
PD: Genetiske variasjoner mellom C57BL/6 substrains bidra til flere fenotypiske forskjeller., Men microbiome kan ha en like viktig rolle i å bestemme flere egenskaper for mus belastning, særlig immunsystemet og metabolsk funksjon.
Mus hentet fra ulike leverandører, eller selv fra forskjellige steder, fra samme leverandør, kan ha svært ulike microbiome profiler. Konkrete eksempler på kjente commensal mikroorganismer med funksjonelle konsekvenser inkluderer segmentert trådformede bakterier (SFB) og Lactobacillus reuteri1,2.
-
Q: Hvor ofte bør vi backcross vår koloni for å unngå genetisk drift?,
PD: Hvis du er å opprettholde en koloni av villtype C57BL/6-mus, vi anbefaler generelt å erstatte det med frisk lager minst hver fire generasjoner. Hvis du bruker en koloni av genmodifiserte mus på en definert C57BL/6 bakgrunn, vurdere backcrossing hver fire til ti generasjoner.
Siden en generasjon av backcrossing erstatter bare halvparten av genomet, det er anbefalt å gjøre dette oftere snarere enn mindre.
Når backcrossing, være forsiktig med å bruke et definert innavlet lager som er identisk bakgrunn av linjen din., Ved hjelp av en upassende C57BL/6 substrain kan påvirke fremtiden studies3,4.
Hvis du er usikker om den genetiske bakgrunnen til din linje, SNP-testing bør utføres (se nedenfor). Et bedre alternativ er å cryopreserve embryo (eller sædceller) fra linjen din og erstatter det med rederived dyr hver ti generasjoner. En ekstra fordel til dette er sikkerheten av å ha en backup for din koloni i tilfelle av uforutsette omstendigheter (sykdom, uhell mismating, anlegg problemer, naturkatastrofer, etc.).
-
Q: Hva er eksperimentelle tilnærminger til å bekrefte substrain?,
PD: Singel nukleotid polymorphism (SNP) panel-testing er en enkel og økonomisk måte å bestemme den genetiske bakgrunnen til musen stammer.
Substrain bakgrunnen lett kan identifiseres ved hjelp av en SNP-panelet utformet for å skille C57BL/6 stammer, slik som Mus B6 SNP-Panelet fra Taconic (seks og nitti, som SNPs totalt). Dette panelet inneholder nitti-fire SNPs som skiller mellom C57BL/6NTac og C57BL/6J substrains.,
Men, dette panelet er mindre følsom for forskjeller i C57BL/6N substrains, og inneholder bare to SNPs som differensierer C57BL/6NJ fra andre C57BL/6N substrains. Før du bruker en målrettet C57BL/6 SNP-panelet, du bør bekrefte at belastningen er på en ren C57BL/6 bakgrunn og ikke har genetisk forurensning fra andre stammer (f.eks. 129S6/Sv, FVB eller BALB/c). Samlet belastning sammensetning kan fastslås ved hjelp av mer omfattende SNP-paneler.
-
Q: Hvordan kan du finne ut hva genet(s) forårsaker fenotypiske forskjeller mellom ulike C57BL/6 substrains?,
PD: Sammenhengen analyse av genetisk krysser mellom ulike C57BL/6 substrains, i kombinasjon med SNP-matriser og hel-genom-sekvensering, kan bidra til å identifisere mulige utløsende gener for en gitt fenotypen. Denne tilnærmingen er utfordrende, men gitt det begrensede antall markører for sammenhengen analyse mellom C57BL/6 substrains.
Bekreftelse av funksjonelle konsekvenser for en genetisk variant ville formelt krever målrettet genet redigering på en definert genetisk bakgrunn., For eksempel, avvikende B-celle utvikling i C57BL/6NHsd substrain ble tilskrevet Dock2m1Hsd variant i denne manner3. Forsiktighet bør tas for å utelukke ikke-genetiske faktorer for forskjeller mellom stammer, slike som microbiome påvirkninger.
Vise Taconic Biovitenskap» Webinar:
- Den Mest Viktig Mus i Verden – Din Guide til C57BL/6 Musen
-
Q: Hvordan kjønn påvirker studere resultatene i C57BL/6-mus?
PD: Kjønn kan ha en stor innvirkning., Bortsett fra åpenbare kroppsvekt og hormonelle forskjeller, C57BL/6 menn har ulike atferdsmessige og metabolske egenskaper i forhold til C57BL/6 kvinner.
– Kjønn bør alltid vurderes i studiedesign. Kjønn er en viktig biologisk variabel, og valget av kjønn(e) som skal inkluderes i studier bør være vitenskapelig forsvarlig. For eksempel, som i 2015, NIH krever begrunnelse for valg av kjønn i alle søknader som involverer dyr i biomedisinsk forskning.
-
Q: Hvordan kan du redusere aggresjon og kjemper atferd i mannlige C57BL/6-mus?,
PD: C57BL/6 hanner kan bli stadig mer aggressive som de blir eldre, eller når utsatt for stressende situasjoner. C57BL/6 hanner er hierarkisk og en dominerende mann kan oppstå i bur med flere mus. Når co-ligger med andre menn fra en ung alder, eller som littermates, sjansene for aggresjon er minimert.
Det er anbefalt å ikke co-house-post-pubertale C57BL/6 hanner med andre ukjente menn. Stud menn bør aldri være plassert med noen annen mann, og flere menn bør aldri være plassert med noen av de kvinnelige(s).,
Stress-induserende situasjoner (prosedyrer, ukjent vaktmester, sykdom, etc.) vil tendere til å øke sannsynligheten for aggresjon. Gi berikelse enheter kan redusere aggressiv atferd, og disse inkluderer hekkende materiale, shepherd shacks, tygge pinner, rør, etc.
-
Q: Hvorfor C57BL/6-mus utvikle ulcerøs dermatitt og hvordan kan det forebygges og/eller behandles?
PD: Alle C57BL/6 substrains er utsatt for å utvikle eksem. Selv om en genetisk årsak er ukjent, er det en sterk miljø-komponent til dette.,
Dermatitt forekomsten kan reduseres ved å opprettholde et stabilt miljø med konstant temperatur og relativ fuktighet mellom 30% og 70%.
Når dermatitt presenterer, dette har historisk sett vært vanskelig å behandle. Men en ny og svært effektiv styring alternativet er å klippet det bakre tåneglene av de berørte mus, for å hindre riper og forverring av tilstanden, mens det heals1. Aktuell salves og antibiotika kan også bidra til å hindre infeksjon under healing, men er vanligvis ikke effektiv alene.,
-
Q: Vil en oppdretter kosthold, for eksempel Purina 5015 chow, føre C57BL/6NTac mus for å bli overvektige og vise metabolsk syndrom?
PD: Høy-energi oppdretter dietter er formulert med økt fett for å støtte post-partum og kontinuerlig hekkende hunner. Vanligvis, disse har rundt 11% fett av vekt, sammenlignet med 5-6% i standard spiser.
C57BL/6NTac mus er utsatt for å utvikle kosthold-indusert fedme og insulinresistens når matet en høy fett diett. Økt adiposity når vedlikeholdes på en 11% fett diett, ville det ikke være overraskende.
Taconic»s standard chow er NIH 31M formel.,
-
Q: Er det en enkel måte å velge en bestemt C57BL/6 substrain å bruke for metabolske studier?
PD: C57BL/6N substrains er ofte anbefalt for metabolske studier, men det er ingen enkel måte å velge den beste for et bestemt program.
utførelsen av en mus i en metabolsk studien vil ikke bare avhenge av genetiske faktorer, men også dens iboende microbiome profil. Den microbiome av en mus vil variere basert på dens opprinnelse og reindrift protokoller.,
Det beste anbefaling er å velge en optimal modell basert på valideringsstudier, med en bestemt substrain hentet fra et bestemt sted.
-
Q: Hvor godt kjenner C57BL/6-mus arbeid for stress-induserende protokoller?
PD: C57BL/6-mus generelt reagerer på stress annerledes fra andre stammer. Mens det er sannsynlig substrain forskjeller, dette er ikke godt definert.
I motsetning til mer stress utsatt for belastninger, for eksempel BALB/c og 129S6/Sv, C57BL/6 presenterer mer metabolsk enn atferdsmessige forstyrrelser i respons til stressfaktorer.,
Kjønn og døgnrytme er trolig også viktige faktorer, i tillegg til sosialisering og andre miljøpåvirkninger. Kronisk stress protokoller godkjent for C57BL/6-mus har vært published6.
-
Q: Hvilke faktorer som forårsaker variasjon i veksten av svulster implantert i C57BL/6-mus?
PD: Det er mange faktorer som kan påvirke vekst av implantert svulster.,
Selv om samme antall celler er det (og de har samme nivå av levedyktighet), den nøyaktige plasseringen av pode og påfølgende perfusjon kan ha dramatiske virkninger på pris av tumor vekst. For eksempel tumor vekst kan variere med en faktor på fire, avhengig av om den er implantert mer anteriorly eller posteriorly7.
nøyaktig plassering av subkutan grafts bør vurderes og kontrolleres i studier. Alder og vekt av dyr, kan også påvirke tumor vekst — jeg vil anbefale å bestille mus med vekt på å normalisere dette., Forskere bør også bestille mus fra ett sted for å minimere effekter fra microbiome forskjeller.
til Slutt, mus er sosialt hierarkisk, og underordnet individer kan ha ulike nivåer av stress som kan påvirke immunsystemet, og tumor vekst. Miljø-berikelse, og passende akklimatisering og driftsmessige forhold (håndtering, lys, støy, osv.) kan bidra til å redusere stress, spesielt hos menn.,
Vise Taconic Biovitenskap» Webinar:
- Den Mest Viktig Mus i Verden – Din Guide til C57BL/6 Musen
Last ned Taconic Biovitenskap» White Paper:
- katastrofeberedskap: Valg og Elementer for å Vurdere Når du Velger Linjer til Cryopreserve