heb je Dr. Philip Dubé”s recente webinar gemist, de belangrijkste muis ter wereld-Your Guide to the C57bl / 6 Mouse? Zijn presentatie onderzocht genetische diversiteit onder c57bl / 6 substrains, de implicaties voor GEM modellen, en het nut van de c57bl/6 muis in studies van metabolisme, immunologie, oncologie en gedrag.vanwege tijdgebrek bleven veel van de vragen die onderzoekers aan zijn Q&stelden, onbeantwoord., Hier zijn alle vragen die we niet konden beantwoorden:
-
Q: hoeveel verschillende c57bl / 6 substrains biedt Taconic Biosciences momenteel?Dr. Philip Dubé (PD): Taconic biedt twee verschillende c57bl/6 substrains, C57BL/6NTac en C57BL/6JBomTac.
-
Q: Is C57BL / 6NTac hetzelfde als C57BL / 6NJ van het Jackson Laboratory?
PD: Taconische ” s C57BL / 6NTac is genetisch vergelijkbaar, maar niet identiek aan de c57bl / 6NJ-stam.beide zijn afkomstig van c57bl/6N embryo ‘ s, eenmaal bewaard bij de National Institutes of Health (NIH) Animal Genetic Resource., Taconic kreeg deze soort in 1991, en het Jackson Laboratory kreeg die van hen in 1997.Taconic handhaaft de genetische stabiliteit van alle ingeteelde muizenstammen door cryopreservatie, zodat C57BL/6NTac zo gelijk mogelijk is aan de oorspronkelijke c57bl/6N lijn die bij de NIH wordt gehandhaafd.
-
Q: Hoe belangrijk is genetische achtergrond ten opzichte van het microbioomprofiel?
PD: genetische variaties tussen c57bl / 6-substraten dragen bij tot meervoudige fenotypische verschillen., Nochtans, kan microbiome een even belangrijke rol in het bepalen van veelvoudige kenmerken van een muisstam, met name immune en metabolische functie hebben.
Muizen afkomstig van verschillende leveranciers, of zelfs van verschillende locaties van dezelfde leverancier, kunnen enorm verschillende microbiome profielen hebben. Specifieke voorbeelden van bekende commensale micro-organismen met functionele effecten zijn gesegmenteerde filamenteuze bacteriën (SFB) en Lactobacillus reuteri1,2.-
Q: hoe vaak moeten we onze kolonie doorkruisen om genetische drift te voorkomen?,
PD: als u een kolonie wildtype c57bl/6-muizen in stand houdt, raden we over het algemeen aan deze te vervangen door verse bouillon ten minste om de vier generaties. Bij gebruik van een kolonie genetisch gemanipuleerde muizen op een gedefinieerde c57bl/6 achtergrond, overwegen backcrossing elke vier tot tien generaties.aangezien één generatie backcrossing slechts de helft van het genoom vervangt, wordt aangeraden dit vaker te doen dan minder.
bij backcross, wees voorzichtig met het gebruik van een gedefinieerde ingeteelde voorraad die identiek is aan de achtergrond van uw lijn., Het gebruik van een ongeschikte c57bl/6-stof kan gevolgen hebben voor toekomstige studies3,4.
Als u niet zeker bent over de genetische achtergrond van uw lijn, moet SNP-test worden uitgevoerd (zie hieronder). Een betere optie is om embryo ‘ s (of sperma) uit uw lijn te cryopreserveren en deze volledig te vervangen door opnieuw gearrangeerde dieren om de tien generaties. Een bijkomend voordeel hiervan is de zekerheid van een back-up voor uw kolonie in geval van onvoorziene omstandigheden (ziekte, accidentele mismating, faciliteitsproblemen, natuurrampen, enz.).-
Q: Wat zijn experimentele methoden om de stof te verifiëren?,
PD: Single nucleotide polymorphism (SNP) panel testing is een eenvoudige en economische manier om de genetische achtergrond van uw muizenstammen te bepalen.
Substrin achtergrond kan gemakkelijk worden geïdentificeerd met behulp van een SNP Paneel ontworpen om c57bl/6 stammen te onderscheiden, zoals de muis B6 SNP paneel van Taconic (zesennegentig SNPs in totaal). Dit paneel bevat vierennegentig SNPs die verschillen tussen c57bl/6NTac en c57bl / 6J substrains.,
Dit paneel is echter minder gevoelig voor verschillen binnen c57bl / 6N substrains, en bevat slechts twee SNP ‘ s die c57bl/6NJ onderscheiden van andere c57bl/6N substrains. Voordat u een gericht c57bl/6 SNP-paneel gebruikt, moet u bevestigen dat uw stam een zuivere c57bl/6-achtergrond heeft en geen genetische besmetting van andere stammen heeft (bijvoorbeeld 129S6/Sv, FVB of BALB/c). De totale stamsamenstelling kan worden bepaald met behulp van uitgebreidere SNP-panelen.-
Q: Hoe kunt u bepalen welke gen (s) fenotypische verschillen veroorzaken tussen verschillende c57bl/6-substraten?,
PD: Koppelingsanalyse van genetische kruisingen tussen verschillende c57bl/6-substraten, in combinatie met SNP-arrays en whole-genome sequencing, kan helpen bij het identificeren van vermeende causatieve genen voor een bepaald fenotype. Deze aanpak is echter een uitdaging, gezien het beperkte aantal markers voor koppelingsanalyse tussen c57bl/6-substraten.de bevestiging van de functionele gevolgen voor een genetische variant zou formeel gerichte genbewerking op een gedefinieerde genetische achtergrond vereisen., Bijvoorbeeld, afwijkende B-cel ontwikkeling in de c57bl / 6NHsd substrine werd toegeschreven aan de dock2m1hsd variant in deze manier3. De voorzichtigheid zou moeten worden genomen om niet genetische factoren voor verschillen tussen spanningen, zoals microbiome invloeden uit te sluiten.
View the Taconic Biosciences” Webinar:
- De belangrijkste muis in de wereld – uw gids voor de C57bl/6 muis
-
Q: Hoe beïnvloedt geslacht onderzoeksresultaten in C57BL/zes muizen?
PD: geslacht kan een grote impact hebben., Afgezien van duidelijke lichaamsgewicht en hormonale verschillen, hebben c57bl/6 mannetjes verschillende gedrags-en metabole eigenschappen in vergelijking met c57bl/6 vrouwtjes.bij de opzet van het onderzoek moet altijd rekening worden gehouden met het geslacht. Geslacht is een belangrijke biologische variabele, en de keuze van geslacht(en) om in studies op te nemen moet wetenschappelijk verantwoord zijn. Zo vereist de NIH vanaf 2015 een rechtvaardiging voor de keuze van het geslacht in alle subsidieaanvragen waarbij dieren betrokken zijn in biomedisch onderzoek.
-
Q: Hoe kunt u agressie en vechtgedrag verminderen bij mannelijke c57bl / 6 muizen?,
PD: C57BL / 6 mannen kunnen steeds agressiever worden naarmate ze ouder worden of wanneer ze worden blootgesteld aan stressvolle situaties. C57bl / 6 mannetjes zijn hiërarchisch en een dominant mannetje kan zich voordoen in kooien met meerdere muizen. Bij co-gehuisvest met andere mannetjes vanaf jonge leeftijd, of als nestgenoten, de kans op agressie worden geminimaliseerd.
Het wordt aanbevolen om postpuberale c57bl/6-mannetjes niet samen te voegen met andere onbekende mannetjes. Stoepmannetjes mogen nooit met een ander mannetje worden gehuisvest, en meerdere mannetjes mogen nooit met een vrouwtje worden gehuisvest.,Stress-veroorzakende situaties (procedures, Onbekende verzorgers, ziekte, enz.) zal de neiging om de waarschijnlijkheid van agressie te verhogen. Het verstrekken van verrijkingsapparaten kan agressief gedrag verminderen; deze omvatten nestmateriaal, herdershacks, kauwsticks, buizen, enz.-
Q: Waarom ontwikkelen C57BL / 6 muizen ulceratieve dermatitis en hoe kan het worden voorkomen en / of behandeld?
PD: alle c57bl / 6-substraten zijn gevoelig voor het ontwikkelen van dermatitis. Hoewel een genetische oorzaak onbekend is, is er een sterke milieucomponent aan dit.,de incidentie van Dermatitis kan tot een minimum worden beperkt door een stabiele omgeving te handhaven met een constante temperatuur en relatieve vochtigheid tussen 30% en 70%.
zodra dermatitis optreedt, is dit historisch moeilijk te behandelen geweest. Echter, een nieuwe en zeer effectieve management optie is om de achterste teennagels van de getroffen muizen clip om krassen en verergering van de aandoening te voorkomen, terwijl het geneest 1. De actuele zalven en de antibiotica kunnen ook helpen om besmetting tijdens het helen te verhinderen, maar zijn over het algemeen niet efficiënt alleen.,-
Q: zou een fokkersdieet, zoals Purina 5015 chow, leiden tot obesitas bij muizen van C57BL/6NTac en een metabool syndroom?
PD: High-energy fokker diëten zijn samengesteld met verhoogd vet ter ondersteuning van postpartum en continu fokkende vrouwtjes. Typisch, deze hebben ongeveer 11% vet in gewicht, vergeleken met 5-6% in standaard chows.
c57bl/6NTac muizen zijn gevoelig voor het ontwikkelen van door dieet geïnduceerde obesitas en insulineresistentie wanneer ze een vetrijk dieet krijgen. Verhoogde adiposity wanneer gehandhaafd op een 11% vet dieet zou niet verrassend zijn.Taconic ‘ s standaard chow is de NIH 31M formule.,-
Q: Is er een eenvoudige manier om een specifieke c57bl/6-stof te selecteren voor metabole studies?
PD: c57bl / 6N-substraten worden vaak aanbevolen voor metabole studies; er is echter geen eenvoudige manier om de beste te kiezen voor een specifieke toepassing.de prestaties van een muis in een metabole studie zullen niet alleen afhangen van genetische factoren, maar ook van het inherente microbioomprofiel. Microbiome van een muis zal variëren gebaseerd op zijn oorsprong en houderijprotocollen.,
De beste aanbeveling is om een optimaal model te kiezen op basis van validatiestudies, met een specifieke stof afkomstig van een specifieke locatie.-
Q: hoe goed werken c57bl / 6 muizen voor stress-inducerende protocollen?
PD: C57BL / 6 muizen reageren over het algemeen anders op stress dan andere stammen. Hoewel er waarschijnlijk verschillen zijn in de ondergrond, zijn deze niet goed gedefinieerd.in tegenstelling tot meer stressgevoelige stammen, zoals BALB/c en 129S6/Sv, vertonen C57BL/6 meer metabole dan gedragsstoornissen als reactie op stressoren.,geslacht en circadiaanse ritmes zijn waarschijnlijk ook belangrijke factoren, naast socialisatie en andere omgevingsinvloeden. Chronische stressprotocollen gevalideerd voor c57bl / 6 muizen zijn gepubliceerd6.
-
Q: Welke factoren veroorzaken variabiliteit in de groei van tumoren geïmplanteerd bij c57bl/6 muizen?
PD: er zijn vele factoren die de groei van geïmplanteerde tumoren kunnen beïnvloeden.,
zelfs als hetzelfde aantal cellen wordt geïmplanteerd (en ze hebben hetzelfde niveau van levensvatbaarheid), kan de exacte plaatsing van het transplantaat en de daaropvolgende perfusie drastische gevolgen hebben voor de snelheid van tumorgroei. Bijvoorbeeld, kan de tumorgroeisnelheid met een factor vier variëren afhankelijk van of het anteriorly of posteriorly wordt geïmplanteerd 7.de exacte plaatsing van subcutane transplantaten moet in de studies worden overwogen en gecontroleerd. De leeftijd en het begingewicht van het dier kan ook invloed hebben op tumorgroei — ik zou aanraden om muizen per gewicht te bestellen om dit te normaliseren., De onderzoekers zouden muizen van één enkele plaats ook moeten opdracht geven om gevolgen van microbiome verschillen te minimaliseren.ten slotte zijn muizen sociaal hiërarchisch, en ondergeschikte individuen kunnen verschillende niveaus van stress hebben die de immuunrespons en tumorgroei kunnen beïnvloeden. Milieuverrijking en passende acclimatisatie-en houderijomstandigheden (hantering, licht, lawaai, enz.) kan helpen om stress te minimaliseren, vooral bij mannen.,Bekijk de Taconic Biosciences” Webinar:
- De Belangrijkste Muis in de Wereld – Uw Gids naar de C57BL/6 Muis
Download de Taconic Biosciences” White Paper:
- rampenbestrijding: De Keuzes en Elementen om te Overwegen Wanneer het Selecteren van Lijnen te Cryopreserve
1. Farkas AM, Panea C, Goto Y, Nakato G, Galan-Diez M, Narushima S, Honda K, Ivanov II., Inductie van Th17 cellen door gesegmenteerde filamenteuze bacteriën in de darm van de muizen. J Immunol Methoden. 2015 Jun; 421: 104-11.
3. Mahajan VS, Demissie E, Mattoo H, Viswanadham V, Varki A, Morris R, Pillai S. opvallende Immune fenotypes in Gen-Targeted Mice Are Driven by a Copy-Number Variant Originating from a Commercially Available C57bl/6 Strain. Cel Rapport 2016 31 Mei; 15 (9): 1901-9.
6. Monteiro S, Roque S, de Sá-Calçada D, Sousa N, Correia-Neves M, Cerqueira JJ. Een efficiënt chronisch onvoorspelbaar stressprotocol om stressgerelateerde reacties te induceren bij c57bl / 6 muizen., Frontpsychiatrie. 2015 Feb 2; 6: 6.
7. Auerbach R, Morrissey LW, Sidky YA. Regionale verschillen in de incidentie en groei van muistumoren na intradermale of subcutane inoculatie. 1978 Jun; 38 (6):1739-44.
-