sentiu falta da recente webinar do Dr. Philip Dubé, o rato mais importante do mundo – o seu guia para o rato C57BL/6? His presentation explored genetic diversity among C57BL/6 substrains, the implications for GEM models, and the utility of the C57BL / 6 mouse in studies of metabolism, immunology, oncology and behavior.devido a restrições de tempo, muitos dos pesquisadores submeteram a sua Q & uma sessão ficou sem resposta., Aqui estão todas as perguntas que não conseguimos chegar a:
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Q: Quantas sub-cadeias C57BL / 6 diferentes oferecem atualmente Biociências Tacônicas?Philip Dubé (PD): Taconic oferece duas substrainas C57BL/6 diferentes, C57BL/6NTac e C57BL/6JBomTac.o C57BL/6NTac é o mesmo que o C57BL / 6NJ do Laboratório Jackson?
PD: Tacónico”s C57BL/6NTac é geneticamente semelhante, mas não idêntico à estirpe C57BL / 6NJ.ambos são derivados de embriões C57BL/6N, uma vez mantidos no National Institutes of Health (NIH) Animal Genetic Resource., Taconic recebeu esta estirpe em 1991, e o laboratório Jackson recebeu a deles em 1997.Taconic mantém a estabilidade genética de todas as estirpes de ratos através da criopreservação, garantindo que C57BL / 6NTac é tão semelhante quanto possível à linha original C57BL/6N mantida no NIH.
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Q: Qual a importância do fundo genético em relação ao perfil microbiológico?
PD: as variações genéticas entre as sub-cadeias C57BL / 6 contribuem para diferenças fenotípicas múltiplas., No entanto, o microbioma pode ter um papel igualmente importante na determinação de múltiplas características de uma estirpe do rato, mais notavelmente as funções imunológica e metabólica.camundongos provenientes de diferentes fornecedores, ou mesmo de locais diferentes do mesmo fornecedor, podem ter perfis microbiológicos muito diferentes. Exemplos específicos de microrganismos comensais conhecidos com impactos funcionais incluem bactérias filamentosas segmentadas (SFB) e Lactobacillus reuteri1,2.com que frequência devemos atravessar a nossa Colónia para evitar a deriva genética?, PD: se você está mantendo uma colônia de ratos wildtype C57BL/6, geralmente recomendamos a sua substituição por estoque fresco pelo menos a cada quatro gerações. Se utilizar uma colónia de ratos geneticamente modificados num fundo definido de C57BL/6, considere a passagem de quatro a dez gerações.uma vez que uma geração de backcrossing só substitui metade do genoma, recomenda-se fazer isso com mais frequência, em vez de menos.quando backcrossing, tenha cuidado para usar um estoque inbred definido que é idêntico ao fundo de sua linha., A utilização de um sub-grupo C57BL/6 inadequado pode ter impacto em futuros estudos3, 4.se não tiver certeza sobre o fundo genético de sua linha, deve ser realizado o teste SNP (ver abaixo). Uma melhor opção é criopreservar embriões (ou espermatozóides) da sua linhagem e substituí-lo completamente por animais de dez em dez gerações. Uma vantagem adicional a isso é a segurança de ter um backup para sua colônia em caso de circunstâncias imprevistas (doença, erro acidental, problemas de instalação, desastres naturais, etc.).
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Q: Quais são as abordagens experimentais para verificar o sub-grupo?,
PD: um único teste de polimorfismo nucleótido (SNP) é uma forma simples e econômica de determinar o fundo genético de suas estirpes de ratinho.o fundo do sub-grupo pode ser facilmente identificado usando um painel SNP projetado para diferenciar estirpes C57BL / 6, como o painel B6 SNP do Taconic (noventa e seis SNPs no total). Este painel inclui noventa e quatro PSN que diferem entre as subestrainas C57BL/6NTac e C57BL/6J.,
No entanto, este painel é menos sensível às diferenças dentro das sub-cadeias C57BL/6N, e inclui apenas dois SNPs que diferenciam C57BL/6NJ de outras sub-cadeias C57BL/6N. Antes de utilizar um painel SNP C57BL/6 específico, deve confirmar que a sua estirpe se encontra num fundo C57BL/6 puro e não apresenta contaminação genética de outras estirpes (por exemplo, 129S6/Sv, FVB ou BALB/c). A composição global da estirpe pode ser determinada utilizando painéis SNP mais abrangentes.
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Q: Como é que se pode determinar que gene (s) está a causar diferenças fenotípicas entre as diferentes sub-cadeias C57BL/6?,
PD: análise da ligação dos cruzamentos genéticos entre diferentes substrainas C57BL / 6, em combinação com matrizes SNP e sequenciação do genoma inteiro, pode ajudar a identificar genes causativos para um determinado fenótipo. Esta abordagem é desafiadora, no entanto, dado o número limitado de marcadores para a análise de ligação entre as sub-cadeias C57BL/6.a confirmação das consequências funcionais para uma variante genética exigiria formalmente a edição de genes em um fundo genético definido., Por exemplo, o desenvolvimento aberrante de células B no sub-grupo C57BL/6NHsd foi atribuído à variante Dock2m1Hsd neste manner3. Devem ser tomadas precauções para excluir factores não genéticos para diferenças entre estirpes, tais como influências microbiológicas.
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- O Mais Importante do Rato no Mundo – o Seu Guia para a C57BL/6 Mouse
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Q: Como é que o género afectam os resultados do estudo em C57BL/6 ratos?
PD: O Sexo pode ter um grande impacto., Além de óbvias diferenças de peso corporal e hormonais, os machos C57BL / 6 têm diferentes propriedades comportamentais e metabólicas em comparação com as fêmeas C57BL / 6.o sexo deve ser sempre considerado no desenho do estudo. O género é uma variável biológica importante e a escolha do(s) género (s) a incluir nos estudos deve ser cientificamente justificável. Por exemplo, a partir de 2015, a NIH requer uma justificação para a escolha do género em todas as candidaturas a subvenções que envolvam animais em investigação biomédica.
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Q: Como Pode reduzir a agressão e o comportamento de luta em ratos machos C57BL/6?,
PD: C57BL / 6 homens podem tornar-se cada vez mais agressivos à medida que envelhecem ou quando sujeitos a situações de stress. Os machos C57BL / 6 são hierárquicos e um macho dominante pode surgir em gaiolas com vários ratos. Quando Co-alojados com outros machos de tenra idade, ou como ninhada, as chances de agressão são minimizadas.
recomenda-se a não co-habitação pós-pubertal C57BL/6 machos com outros machos não familiares. Os machos reprodutores nunca devem ser alojados com qualquer outro macho, e múltiplos machos nunca devem ser alojados com qualquer fêmea.,situações de indução de estresse (procedimentos, cuidadores desconhecidos, doença, etc.) tenderá a aumentar a probabilidade de agressão. Fornecer dispositivos de enriquecimento pode reduzir comportamentos agressivos; estes incluem material de nidificação, barracas de pastor, mastigadores, tubos, etc.por que razão os ratos C57BL/6 desenvolvem dermatite ulcerativa e como podem ser prevenidos e/ou tratados? PD: todas as sub-cadeias C57BL / 6 são propensas ao desenvolvimento de dermatite. Embora uma causa genética é desconhecida, há um forte componente ambiental para isso.,a incidência de dermatite pode ser minimizada mantendo um ambiente estável com temperatura constante e umidade relativa entre 30% e 70%.uma vez que a dermatite apresenta, isto tem sido historicamente difícil de tratar. No entanto, uma nova e muito eficaz opção de gestão é cortar as unhas dos pés traseiros dos ratos afetados para evitar arranhões e agravamento da condição, enquanto cura1. Salvas tópicas e antibióticos também podem ajudar a prevenir a infecção durante a cura, mas geralmente não são eficazes sozinho.,Q: Uma dieta reprodutora, como Purina 5015 chow, faria com que ratos C57BL / 6NTac se tornassem obesos e exibissem síndrome metabólica? PD: as dietas reprodutoras de alta energia são formuladas com um aumento da gordura para suportar pós-parto e fêmeas reprodutoras. Normalmente, estes têm cerca de 11% de gordura em peso, em comparação com 5-6% em Arcos padrão.os ratinhos C57BL / 6NTac são propensos a desenvolver obesidade induzida pela dieta e resistência à insulina quando alimentados com uma dieta rica em gorduras. Aumento de adiposidade quando mantido em uma dieta de 11% de gordura não seria surpreendente.Taconic ” s standard chow é a fórmula NIH 31M.,existe uma forma simples de seleccionar um sub-grupo C57BL/6 específico a utilizar nos estudos metabólicos? PD: as sub-cadeias C57BL / 6N são frequentemente recomendadas para estudos metabólicos; no entanto, não há uma maneira simples de escolher a melhor para uma aplicação específica.o desempenho de um rato em um estudo metabólico não dependerá apenas de fatores genéticos, mas também de seu perfil microbiológico inerente. O microbioma de um rato variará com base na sua origem e nos seus protocolos de criação.,
a melhor recomendação é escolher um modelo ideal baseado em estudos de validação, com um sub-grupo específico obtido a partir de um local específico.
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Q: até que ponto os ratos C57BL/6 trabalham para protocolos de indução de stress?
PD: em geral, os ratinhos C57BL / 6 respondem ao stress de forma diferente das outras estirpes. Embora existam provavelmente diferenças substrain, estes não são bem definidos.em contraste com estirpes mais propensas ao estresse, tais como BALB/c e 129S6/Sv, C57BL/6 apresentam mais distúrbios metabólicos do que comportamentais em resposta a estressores.,ritmos de gênero e Circadiano também são fatores importantes, além de socialização e outras influências ambientais. Foram publicados protocolos de stress crónico validados para ratos C57BL/6.
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Q: Quais os factores que causam variabilidade no crescimento dos tumores implantados em ratinhos C57BL/6?
PD: existem muitos fatores que podem influenciar o crescimento de tumores implantados.,mesmo se o mesmo número de células são implantadas (e eles têm o mesmo nível de viabilidade), a colocação exata do enxerto e subsequente perfusão pode ter impactos drásticos na taxa de crescimento do tumor. Por exemplo, a taxa de crescimento do tumor pode variar por um fator de quatro, dependendo se ele é implantado mais arterioro7.a colocação exacta dos enxertos subcutâneos deve ser considerada e controlada em estudos. A idade e o peso inicial do animal também pode impactar o crescimento do tumor-eu recomendaria encomendar ratos pelo peso para normalizar isto., Os investigadores devem também encomendar ratos a partir de um único local para minimizar os efeitos das diferenças microbiológicas.finalmente, os ratos são socialmente hierárquicos, e indivíduos subordinados podem ter diferentes níveis de estresse que podem afetar as respostas imunitárias e o crescimento do tumor. Enriquecimento ambiental e condições adequadas de aclimatação e criação (manuseamento, luz, ruído, etc.)) pode ajudar a minimizar o stress, particularmente nos homens.,
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