ai dor de Dr. Philip Dube”s webinar recente, Cele Mai Importante Mouse din Lume – Ghidul Tau de C57BL/6 Mouse-ul? Prezentarea lui explorat diversității genetice între C57BL/6 substrains, implicațiile pentru GEM modele, și utilitatea C57BL/6 mouse-ul în studiile de metabolism, imunologie, oncologie și comportament.
din cauza constrângerilor de timp, multe dintre întrebările pe care cercetătorii le-au prezentat Q&o sesiune a rămas fără răspuns., Iată toate întrebările la care nu am putut ajunge:
-
Î: câte substanțe diferite C57BL/6 oferă în prezent Taconic Biosciences?
Dr. Philip Dube (PD): Taconic oferă două tipuri diferite de C57BL/6 substrains, C57BL/6NTac și C57BL/6JBomTac.
-
Q: Este C57BL/6NTac la fel ca C57BL/6NJ din Jackson Laborator?
PD: Taconic”s C57BL/6NTac este genetic similare, dar nu identice cu C57BL/6NJ tulpina.
ambele sunt derivate din embrioni C57BL/6N, o dată menținute la National Institutes of Health (NIH) Resurse Genetice animale., Taconic a primit această tulpină în 1991, iar Laboratorul Jackson a primit-o pe a lor în 1997.
Taconic menține stabilitatea genetică a tuturor consangvinizate mouse-ul tulpini prin crioconservare, asigurându-se că C57BL/6NTac este cât mai apropiate de original C57BL/6N linie menținut la NIH.
-
Î: Cât de important este fondul genetic în raport cu profilul microbiomului?
PD: variațiile genetice între substenele C57BL / 6 contribuie la diferențe fenotipice multiple., Cu toate acestea, microbiomul poate avea un rol la fel de important în determinarea mai multor caracteristici ale unei tulpini de șoarece, în special funcția imună și metabolică.
șoarecii proveniți de la diferiți furnizori sau chiar din locații diferite de la același furnizor pot avea profiluri microbiome foarte diferite. Exemple specifice de microorganisme comensale cunoscute cu impact funcțional includ bacteriile filamentoase segmentate (SFB) și Lactobacillus reuteri1,2.
-
Î: Cât de des ar trebui să ne întoarcem colonia pentru a evita deriva genetică?,
PD: Dacă ești menținerea o colonie de sușă sălbatică C57BL/6 șoareci, în general, am recomanda inlocuirea cu stoc proaspăt cel puțin la fiecare patru generații. Dacă utilizați o colonie de șoareci modificați genetic pe un fundal c57bl/6 definit, luați în considerare backcrossing la fiecare patru până la zece generații.
deoarece o generație de backcrossing înlocuiește doar jumătate din genom, se recomandă să faceți acest lucru mai frecvent decât mai puțin.
când treceți înapoi, aveți grijă să utilizați un stoc consangvinizat definit care este identic cu fundalul liniei dvs., Utilizarea unui substrat c57bl/6 necorespunzător poate avea impact asupra studiilor viitoare3,4.
dacă nu sunteți sigur cu privire la fondul genetic al liniei dvs., trebuie efectuată testarea SNP (vezi mai jos). O opțiune mai bună este să crioconservați embrionii (sau sperma) de pe linia dvs. și să o înlocuiți complet cu animale rederivate la fiecare zece generații. Un avantaj suplimentar în acest sens este securitatea de a avea o copie de rezervă pentru colonia dvs. în caz de circumstanțe neprevăzute (boală, mismating accidentală, probleme de instalație, dezastre naturale etc.).
-
Q: Care sunt abordările experimentale pentru verificarea substratului?,
PD: testarea panoului polimorfismului cu un singur nucleotid (SNP) este o modalitate simplă și economică de a determina fundalul genetic al tulpinilor de șoarece.
fundalul Subtrain poate fi identificat cu ușurință folosind un panou SNP conceput pentru a diferenția tulpinile C57BL/6, cum ar fi panoul SNP B6 de la Taconic (nouăzeci și șase SNP în total). Acest panou include nouăzeci și patru de SNPs care diferă între C57BL/6NTac și C57BL/6J substrains.,
cu toate Acestea, acest panou este mai puțin sensibil la diferențele în C57BL/6N substrains, și include doar două Snp care diferentiaza C57BL/6NJ din alte C57BL/6N substrains. Înainte de a utiliza un vizate C57BL/6 SNP panou, tu ar trebui să confirme că tulpina este pe o pură C57BL/6 de fond și nu au genetice contaminare de la alte tulpini (de exemplu, 129S6/Sv, reduce valorile ridicate sau BALB/c). Compoziția generală a tulpinii poate fi determinată folosind panouri SNP mai cuprinzătoare.
-
Î: Cum puteți determina ce genă(gene) cauzează diferențe fenotipice între diferitele substanțe c57bl/6?,
PD: analiza Hidraulic de cruci genetice între diferite C57BL/6 substrains, în combinație cu SNP tablouri și tot-secventiere a genomului, poate ajuta la identificarea prezumtiv cauzator de gene pentru un anumit fenotip. Cu toate acestea, această abordare este dificilă, având în vedere numărul limitat de markeri pentru analiza legăturii dintre substenele C57BL/6.
confirmarea consecințelor funcționale pentru o variantă genetică ar necesita în mod oficial editarea genelor vizate pe un fond genetic definit., De exemplu, aberantă a celulelor B de dezvoltare în C57BL/6NHsd substrain a fost atribuită Dock2m1Hsd variantă în acest manner3. Se recomandă prudență pentru a exclude factorii non-genetici pentru diferențele dintre tulpini, cum ar fi influențele microbiomului.
Vizualizare Taconic Biosciences” Webinar:
- Cele Mai Importante Mouse din Lume – Ghidul Tau de C57BL/6 Mouse-ul
-
Q: Cum face sex afecta rezultatele studiului în C57BL/6 soareci?
PD: sexul poate avea un impact major., În afară de greutatea corporală evidentă și diferențele hormonale, bărbații C57BL/6 au proprietăți comportamentale și metabolice diferite în comparație cu femelele C57BL/6.
genul ar trebui să fie întotdeauna luate în considerare în proiectarea de studiu. Sexul este o variabilă biologică importantă, iar alegerea sexului(sexelor) care trebuie inclusă în studii ar trebui să fie justificabilă din punct de vedere științific. De exemplu, începând cu 2015, NIH necesită o justificare pentru alegerea sexului în toate cererile de grant care implică animale în cercetarea biomedicală.
-
Î: Cum puteți reduce agresivitatea și comportamentul de luptă la șoarecii masculi C57BL/6?,
PD: c57bl / 6 bărbații pot deveni din ce în ce mai agresivi pe măsură ce îmbătrânesc sau când sunt supuși unor situații stresante. Masculii C57BL/6 sunt ierarhici și un mascul dominant poate apărea în cuști cu șoareci multipli. Atunci când sunt co-adăpostiți cu alți bărbați de la o vârstă fragedă sau ca colegi, șansele de agresiune sunt reduse la minimum.
Se recomandă să nu co-house post-pubertală c57bl/6 Bărbați cu alți bărbați necunoscuți. Masculii armăsari nu ar trebui să fie adăpostiți niciodată cu niciun alt mascul, iar masculii multipli nu ar trebui să fie adăpostiți niciodată cu nicio femelă(femele).,
situații de inducere a stresului (proceduri, îngrijitori necunoscuți, boli etc.) va avea tendința de a crește probabilitatea agresiunii. Furnizarea de dispozitive de îmbogățire poate reduce comportamentele agresive; acestea includ materialul de cuibărit, barăcile ciobănești, bastoanele de mestecat, tuburile etc.
-
Î: De ce șoarecii C57BL/6 dezvoltă dermatită ulcerativă și cum poate fi prevenită și/sau tratată?
PD: toate substanele C57BL / 6 sunt predispuse la dezvoltarea dermatitei. Deși o cauză genetică este necunoscută, există o componentă puternică de mediu în acest sens.,
incidența dermatitei poate fi minimizată prin menținerea unui mediu stabil cu temperatură constantă și umiditate relativă între 30% și 70%.
odată ce dermatita prezintă, acest lucru a fost istoric dificil de tratat. Cu toate acestea, o opțiune de gestionare nouă și foarte eficientă este de a fixa unghiile din spate ale șoarecilor afectați pentru a preveni zgârierea și agravarea afecțiunii în timp ce se vindecă1. Alifiile topice și antibioticele pot ajuta, de asemenea, la prevenirea infecției în timpul vindecării, dar, în general, nu sunt eficiente singure.,
-
Î: o dietă de crescător, cum ar fi Purina 5015 chow, ar determina șoarecii C57BL/6NTac să devină obezi și să afișeze sindromul metabolic?
PD: dietele de creștere cu energie ridicată sunt formulate cu grăsimi crescute pentru a susține femelele post-partum și care se reproduc continuu. De obicei, acestea au aproximativ 11% grăsime în greutate, comparativ cu 5-6% în chows standard.
șoarecii C57BL/6ntac sunt predispuși la dezvoltarea obezității induse de dietă și a rezistenței la insulină atunci când sunt hrăniți cu o dietă bogată în grăsimi. Creșterea adipozității atunci când este menținută pe o dietă de 11% grăsime nu ar fi surprinzătoare.
Taconic ” s standard chow este NIH 31M formula.,
-
Q: există o modalitate simplă de a selecta un anumit c57bl / 6 substain pentru a utiliza pentru studii metabolice?
PD: C57BL/6N substrains sunt adesea recomandate pentru studii metabolice; cu toate acestea, nu există nici o modalitate simplă de a alege cel mai bun pentru o anumită aplicație.
performanța unui șoarece într-un studiu metabolic nu va depinde numai de factorii genetici, ci și de profilul său microbiom inerent. Microbiomul unui șoarece va varia în funcție de originea și protocoalele de creștere.,
cea mai bună recomandare este de a alege un model optim bazat pe studii de validare, cu un anumit subtrain provenind dintr-o anumită locație.
-
Î: Cât de bine funcționează șoarecii C57BL / 6 pentru protocoalele de inducere a stresului?
PD: șoarecii C57BL / 6, în general, răspund la stres diferit față de alte tulpini. Deși există diferențe probabile, acestea nu sunt bine definite.
În contrast cu mai mult stres predispuse tulpini, cum ar fi BALB/c si 129S6/Sv, C57BL/6 prezenta mai multe metabolice decât tulburări de comportament ca răspuns la factorii de stres.,
sexul și ritmurile circadiene sunt, de asemenea, factori importanți, pe lângă socializare și alte influențe de mediu. Au fost publicate protocoale de stres cronic validate pentru șoarecii C57BL/66.
-
Q: Ce factori determină variabilitatea creșterii tumorilor implantate la șoarecii C57BL/6?
PD: există mulți factori care pot influența creșterea tumorilor implantate.,
chiar dacă același număr de celule sunt implantate (și au același nivel de viabilitate), plasarea exactă a grefei și perfuzia ulterioară pot avea efecte drastice asupra ratei de creștere a tumorii. De exemplu, rata de creștere a tumorii poate varia cu un factor de patru, în funcție de faptul dacă este implantat mai anterior sau posterior7.
plasarea exactă a grefelor subcutanate trebuie luată în considerare și controlată în studii. Vârsta și greutatea inițială a animalului pot afecta, de asemenea, creșterea tumorii — aș recomanda ordonarea șoarecilor în greutate pentru a normaliza acest lucru., Cercetătorii ar trebui, de asemenea, să comande șoareci dintr-o singură locație pentru a minimiza efectele diferențelor microbiome.
În cele din urmă, șoarecii sunt ierarhici social, iar indivizii subordonați pot avea niveluri diferite de stres care pot afecta răspunsurile imune și creșterea tumorii. Îmbogățirea mediului și condiții adecvate de aclimatizare și creștere (manipulare, lumină, zgomot etc.).) poate ajuta la minimizarea stresului, în special la bărbați.,
Vizualizare Taconic Biosciences” Webinar:
- Cele Mai Importante Mouse din Lume – Ghidul Tau de C57BL/6 Mouse-ul
Descărcați Taconic Biosciences” cartea Albă:
- Pregătire în caz de Dezastre: Alegerile și Elemente de luat în Considerare atunci Când Selectarea de Linii de Cryopreserve