avez – vous manqué le récent webinaire du Dr Philip Dubé, la souris la plus importante au monde-Votre Guide de la souris C57BL/6? Sa présentation a exploré la diversité génétique parmi les sous-souches C57BL/6, les implications pour les modèles GEM et l’utilité de la souris C57BL / 6 dans les études du métabolisme, de l’immunologie, de l’oncologie et du comportement.
En raison de contraintes de temps, de nombreuses questions que les chercheurs ont soumises à son Q&une session est restée sans réponse., Voici toutes les questions auxquelles nous n’avons pas pu répondre:
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Q: Combien de sous-réseaux C57BL/6 différents Taconic Biosciences offre-t-il actuellement?
Dr Philip Dubé (PD): Taconic offre deux sous-trains C57BL/6 différents, C57BL/6NTac et C57BL / 6JBomTac.
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Q: Le C57BL/6NTac est-il identique au C57BL / 6NJ du laboratoire Jackson?
PD: Taconic »s C57BL/6NTac est génétiquement similaire, mais pas identique à la souche C57BL / 6NJ.
Les deux sont dérivés d’embryons C57BL/6n, une fois conservés aux National Institutes of Health (NIH) Animal Genetic Resource., Taconic a reçu cette souche en 1991, et le laboratoire Jackson a reçu la leur en 1997.
Taconic maintient la stabilité génétique de toutes les souches de souris consanguines par cryoconservation, en veillant à ce que C57BL/6NTac soit aussi similaire que possible à la lignée originale C57BL/6n maintenue au NIH.
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Q: Quelle est l’importance des antécédents génétiques par rapport au profil du microbiome?
PD: les variations génétiques entre les sous-souches C57BL / 6 contribuent à de multiples différences phénotypiques., Cependant, le microbiome peut jouer un rôle tout aussi important dans la détermination de multiples caractéristiques d’une souche de souris, notamment la fonction immunitaire et métabolique.
Les souris provenant de différents fournisseurs, ou même de différents endroits du même fournisseur, peuvent avoir des profils de microbiome très différents. Des exemples spécifiques de micro-organismes commensaux connus ayant des impacts fonctionnels comprennent les bactéries filamenteuses segmentées (SFB) et Lactobacillus reuteri1,2.
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Q: à Quelle fréquence devrions-nous rétrocroisement notre colonie pour éviter la dérive génétique?,
PD: si vous conservez une colonie de souris wildtype C57BL / 6, nous recommandons généralement de la remplacer par du stock frais au moins toutes les quatre générations. Si vous utilisez une colonie de souris génétiquement modifiées sur un fond C57BL/6 défini, envisagez de rétrocroiser toutes les quatre à dix générations.
étant donné qu’une génération de rétrocroisement ne remplace que la moitié du génome, il est recommandé de le faire plus fréquemment plutôt que moins.
lors du rétrocroisement, veillez à utiliser un stock consanguin défini qui est identique à l’arrière-plan de votre ligne., L’utilisation d’un sous-réseau C57BL/6 inapproprié peut avoir une incidence sur les études ultérieures3,4.
En cas de doute sur le fond génétique de votre lignée, un test SNP doit être effectué (voir ci-dessous). Une meilleure option consiste à cryoconserver les embryons (ou les spermatozoïdes) de votre lignée et à les remplacer complètement par des animaux redérivés toutes les dix générations. Un avantage supplémentaire à cela est la sécurité d’avoir une sauvegarde pour votre colonie en cas de circonstances imprévues (maladie, mauvaise adaptation accidentelle, problèmes d’installation, catastrophes naturelles, etc.).
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Q: Quelles sont les approches expérimentales pour vérifier le sous-réseau?,
PD: les tests sur panel de polymorphisme nucléotidique unique (SNP) sont un moyen simple et économique de déterminer le fond génétique de vos souches de souris.
L’arrière-plan du sous-groupe peut être facilement identifié à l’aide d’un panneau SNP conçu pour différencier les souches C57BL/6, telles que le Panneau SNP souris B6 de Taconic (quatre-vingt-seize SNP au total). Ce panneau comprend quatre-vingt-quatorze SNP qui diffèrent entre les sous-trains C57BL/6NTac et C57BL/6j.,
cependant, ce panneau est moins sensible aux différences au sein des sous-réseaux C57BL/6N, et ne comprend que deux SNP qui différencient C57BL/6NJ des autres sous-réseaux C57BL/6N. Avant d’utiliser un panneau SNP ciblé C57BL/6, Vous devez confirmer que votre souche est sur un fond pur C57BL/6 et ne présente pas de contamination génétique provenant d’autres souches (par exemple 129S6/Sv, FVB ou BALB/c). La composition globale de la souche peut être déterminée à l’aide de panneaux SNP plus complets.
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Q: Comment Pouvez-vous déterminer quels gènes sont à l’origine des différences phénotypiques entre les différentes sous-souches C57BL/6?,
PD: L’analyse de liaison de croisements génétiques entre différentes sous-souches C57BL / 6, en combinaison avec des réseaux SNP et le séquençage du génome entier, peut aider à identifier les gènes responsables putatifs pour un phénotype donné. Cette approche est cependant difficile, étant donné le nombre limité de marqueurs pour l’analyse de liaison entre les sous-réseaux C57BL/6.
La Confirmation des conséquences fonctionnelles pour une variante génétique nécessiterait formellement une modification génétique ciblée sur un fond génétique défini., Par exemple, le développement aberrant des cellules B dans le sous-groupe C57BL/6NHsd a été attribué à la variante Dock2m1Hsd de cette manière3. Des précautions doivent être prises pour exclure les facteurs non génétiques des différences entre les souches, tels que les influences du microbiome.
voir le webinaire » Taconic Biosciences »:
- La Souris la plus importante au monde – Votre Guide de la souris C57BL/6
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Q: Comment le genre affecte-t-il les résultats de souris C57BL/6?
PD: le genre peut avoir un impact majeur., Mis à part le poids corporel évident et les différences hormonales, les mâles C57BL/6 ont des propriétés comportementales et métaboliques différentes par rapport aux femelles C57BL/6.
Le genre doit toujours être pris en compte dans la conception de l’étude. Le sexe est une variable biologique importante, et le choix du ou des Sexe(s) à inclure dans les études devrait être scientifiquement justifiable. Par exemple, à partir de 2015, le NIH exige une justification du choix du sexe dans toutes les demandes de subvention impliquant des animaux dans la recherche biomédicale.
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Q: Comment Pouvez-vous réduire l’agressivité et le comportement de combat chez les souris mâles C57BL/6?,
PD: C57BL / 6 les mâles peuvent devenir de plus en plus agressifs en vieillissant ou lorsqu’ils sont soumis à des situations stressantes. C57BL / 6 les mâles sont hiérarchiques et un mâle dominant peut apparaître dans des cages avec plusieurs souris. Lorsqu’ils sont hébergés avec d’autres hommes dès leur plus jeune âge, ou en tant que compagnons de litière, les risques d’agression sont minimisés.
Il est recommandé de ne pas cohabiter les mâles post-pubertaires C57BL/6 avec d’autres mâles inconnus. Les mâles étalons ne devraient jamais être logés avec un autre mâle, et plusieurs mâles ne devraient jamais être logés avec une ou plusieurs femelles.,
Situations induisant le Stress (procédures, soignants inconnus, maladie, etc.) aura tendance à augmenter la probabilité d’agression. Fournir des dispositifs d’enrichissement peut réduire les comportements agressifs; ceux-ci incluent le matériel de nidification, les cabanes de berger, les bâtonnets à mâcher, les tubes, etc.
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Q: Pourquoi les souris C57BL/6 développent-elles une dermatite ulcéreuse et comment la prévenir et/ou la traiter?
PD: toutes les sous-cellules C57BL / 6 sont sujettes au développement de dermatites. Bien qu’une cause génétique soit inconnue, il y a une forte composante environnementale à cela.,
L’incidence de la dermatite peut être minimisée en maintenant un environnement stable avec une température et une humidité relative constantes entre 30% et 70%.
Une fois que la dermatite présente, cela a toujours été difficile à traiter. Cependant, une nouvelle option de gestion très efficace consiste à couper les ongles arrière des souris touchées pour éviter les rayures et l’aggravation de la maladie pendant qu’elle guérit1. Les remèdes topiques et les antibiotiques peuvent également aider à prévenir l’infection pendant la guérison, mais ne sont généralement pas efficaces seuls.,
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Q: un régime alimentaire d’éleveur, tel que Purina 5015 chow, causerait-il des souris C57BL/6NTac à devenir obèses et à présenter un syndrome métabolique?
PD: les régimes d’élevage à haute énergie sont formulés avec une augmentation de la graisse pour soutenir les femelles post-partum et reproductrices en continu. En règle générale, ceux-ci ont environ 11% de matières grasses en poids, par rapport à 5-6% dans les chows standard.
Les souris C57BL/6ntac sont sujettes à l’obésité induite par l’alimentation et à la résistance à l’insuline lorsqu’elles sont nourries avec un régime riche en graisses. Une augmentation de l’adiposité lorsqu’elle est maintenue sur un régime de 11% de matières grasses ne serait pas surprenante.
Le Chow standard de Taconic est la formule NIH 31m.,
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Q: Existe-t-il un moyen simple de sélectionner un sous-groupe C57BL/6 spécifique à utiliser pour les études métaboliques?
PD: C57BL / 6N sont souvent recommandés pour les études métaboliques; cependant, il n’y a pas de moyen simple de choisir le meilleur pour une application spécifique.
la performance d’une souris dans une étude métabolique dépendra non seulement de facteurs génétiques, mais aussi de son profil microbiome inhérent. Le microbiome d’une souris varie en fonction de son origine et des protocoles d’élevage.,
La meilleure recommandation est de choisir un modèle optimal basé sur des études de validation, avec un sous-souche provenant d’un emplacement spécifique.
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Q: Dans quelle mesure les souris C57BL/6 fonctionnent-elles pour les protocoles induisant le stress?
PD: C57BL / 6 en général, les souris réagissent au stress différemment des autres souches. Bien qu’il existe probablement des différences de sous-réseau, celles-ci ne sont pas bien définies.
contrairement aux souches plus sujettes au stress, telles que BALB/c et 129S6/Sv, C57BL/6 présentent plus de perturbations métaboliques que comportementales en réponse aux facteurs de stress.,
Le sexe et les rythmes circadiens sont également des facteurs importants, en plus de la socialisation et d’autres influences environnementales. Des protocoles de stress chronique validés pour les souris C57BL/6 ont été publiés6.
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Q: Quels facteurs provoquent la variabilité de la croissance des tumeurs implantées chez les souris C57BL/6?
PD: de nombreux facteurs peuvent influencer la croissance des tumeurs implantées.,
même si le même nombre de cellules sont implantées (et qu’elles ont le même niveau de viabilité), le placement exact du greffon et la perfusion subséquente peuvent avoir des impacts drastiques sur le taux de croissance tumorale. Par exemple, le taux de croissance tumorale peut varier d’un facteur quatre selon qu’il est implanté plus avant ou postérieur7.
la mise en place exacte des greffons sous-cutanés doit être envisagée et contrôlée dans les études. L’âge et le poids de départ de l’animal peuvent également avoir un impact sur la croissance tumorale — je recommanderais de commander des souris en poids pour normaliser cela., Les chercheurs devraient également commander des souris à partir d’un seul endroit pour minimiser les effets des différences de microbiome.
Enfin, les souris sont socialement hiérarchiques, et les individus subordonnés peuvent avoir différents niveaux de stress qui peuvent affecter les réponses immunitaires et la croissance tumorale. Enrichissement de l’environnement et conditions d’acclimatation et d’élevage appropriées (manutention, lumière, bruit, etc.) peut aider à minimiser le stress, en particulier chez les hommes.,
voir le webinaire » Taconic Biosciences »:
- La Souris la plus importante au monde – Votre Guide de la souris C57BL/6
télécharger le livre blanc »Taconic Biosciences »:
- préparation aux catastrophes: les choix et les éléments à considérer lors de la sélection des lignes à cryoconserver