chyběl vám nedávný webinář Dr. Philip Dubé, nejdůležitější myš na světě – Váš průvodce myší C57bl / 6? Jeho prezentace zkoumány genetické rozmanitosti mezi C57BL/6 substrains, důsledky pro GEM modely, a utility z C57BL/6 myší ve studiích metabolismu, imunologie, onkologie a chování.
vzhledem k časovým omezením, mnoho z otázek, které vědci předložili jeho Q&relace šla nezodpovězena., Zde jsou všechny otázky, na které jsme se nemohli dostat:
-
Q: kolik různých substrátů c57bl / 6 V současné době nabízí Taconic Biosciences?
Dr. Philip Dubé( PD): Taconic nabízí dvě různé substráty c57bl/6, c57bl/6NTac a C57BL/6JBomTac.
-
Q: je C57BL / 6NTac stejný jako C57BL / 6NJ z Jackson Laboratory?
PD: Taconic “ s c57bl/6NTac je geneticky podobný, ale není totožný s kmenem C57BL / 6NJ.
oba jsou odvozeny z embryí c57bl/6N, jednou udržovaných v genetickém zdroji zvířat National Institutes of Health (NIH)., Taconic obdržel tento kmen v roce 1991 a Jackson Laboratory obdržel jejich v roce 1997.
Taconic udržuje genetickou stabilitu všech inbredních myších kmenů přes kryokonzervace, zajistit, že C57BL/6NTac je co nejpodobnější původní C57BL/6N-line udržována na NIH.
-
Q: Jak důležité je genetické pozadí vzhledem k profilu mikrobiomu?
PD: genetické variace mezi substráty C57BL / 6 přispívají k více fenotypovým rozdílům., Mikrobiom však může mít stejně důležitou roli při určování více charakteristik kmene myši, zejména imunitní a metabolické funkce.
Myši pocházejí od různých dodavatelů, nebo dokonce z různých míst od stejného výrobce, může mít diametrálně odlišné mikrobiomu profily. Specifické příklady známých komenzálních mikroorganismů s funkčními dopady zahrnují segmentované vláknité bakterie (SFB) a Lactobacillus reuteri1,2.
-
Q: Jak často bychom měli backcross naši kolonii, abychom se vyhnuli genetickému driftu?,
PD: pokud udržujete kolonii myší wildtype c57bl / 6, obecně doporučujeme nahradit ji čerstvým zásobníkem alespoň každé čtyři generace. Pokud používáte kolonii geneticky upravených myší na definovaném pozadí C57BL / 6, zvažte backcrossing každé čtyři až deset generací.
vzhledem k tomu, že jedna generace backcrossingu nahrazuje pouze polovinu genomu, doporučuje se to provádět častěji než méně.
Při zpětném křížení buďte opatrní při použití definované inbredové zásoby, která je totožná s pozadím vaší linky., Použití nevhodného substrátu C57BL / 6 může ovlivnit budoucí studie3, 4.
Pokud si nejste jisti genetickým pozadím vaší linky, je třeba provést testování SNP (viz níže). Lepší možností je kryoprezerovat embrya (nebo spermie) z vaší linie a zcela je nahradit červenými zvířaty každých deset generací. Další výhodou je bezpečnost mít zálohu pro vaši kolonii v případě nepředvídaných okolností (nemoc, náhodné neshody, problémy zařízení, přírodní katastrofy atd.).
-
Q: Jaké jsou experimentální přístupy k ověření podvrtnutí?,
PD: jednonukleotidový polymorfismus (SNP) panel testování je jednoduchý a ekonomický způsob, jak zjistit genetické pozadí myších kmenů.
pozadí podvrtnutí lze snadno identifikovat pomocí panelu SNP určeného k odlišení kmenů C57BL / 6, jako je Panel myši B6 SNP od Taconic (celkem devadesát šest SNP). Tento panel obsahuje devadesát čtyři SNP, které se liší mezi substráty c57bl/6NTac a c57bl/6J.,
tento panel je však méně citlivý na rozdíly v substrátech c57bl / 6N a obsahuje pouze dva SNP, které odlišují c57bl/6NJ od ostatních substrátů c57bl / 6N. Před použitím cílené C57BL/6 SNP panel, byste měli potvrdit, že váš kmen je na čistě C57BL/6 pozadí a nemá genetické kontaminace z jiných kmenů (např. 129S6/Sv, FVB nebo BALB/c). Celkové složení kmene lze určit pomocí komplexnějších panelů SNP.
-
Q: Jak můžete zjistit, jaké geny způsobují fenotypové rozdíly mezi různými substráty C57BL / 6?,
PD: Vazebné analýzy genetických křížení mezi různými C57BL/6 substrains, v kombinaci s SNP arrays a whole-genome sequencing, může pomoci identifikovat domnělé původce genů pro daný fenotyp. Tento přístup je však náročný Vzhledem k omezenému počtu markerů pro analýzu vazeb mezi substráty c57bl / 6.
potvrzení funkčních důsledků pro genetickou variantu by formálně vyžadovalo cílenou editaci genů na definovaném genetickém pozadí., Například aberantní vývoj B buněk v substrainu C57BL / 6NHsd byl v tomto manner3 přičítán variantě Dock2m1Hsd. Je třeba dbát opatrnosti, aby se vyloučily genetické faktory rozdílů mezi kmeny, jako jsou mikrobiomové vlivy.
Zobrazit Rozhledně Biosciences“ Webinar:
- Nejdůležitější Myš na Světě – Váš Průvodce do C57BL/6 Myší
-
Q: Jak má pohlaví vliv na studijní výsledky v C57BL/6 myších?
PD: pohlaví může mít velký dopad., Kromě zjevné tělesné hmotnosti a hormonální rozdíly, c57bl/6 muži mají různé behaviorální a metabolické vlastnosti ve srovnání s c57bl / 6 ženy.
pohlaví by mělo být vždy zváženo ve studijním designu. Pohlaví je důležitou biologickou proměnnou a volba pohlaví(pohlaví), která má být zařazena do studií, by měla být vědecky odůvodnitelná. Například od roku 2015 vyžaduje NIH odůvodnění pro výběr pohlaví ve všech žádostech o granty zahrnujících zvířata do biomedicínského výzkumu.
-
Q: Jak můžete snížit agresivitu a bojové chování u samců c57bl/6 myší?,
PD: c57bl / 6 muži mohou být stále agresivnější, protože stárnou nebo jsou vystaveni stresovým situacím. C57bl / 6 samci jsou hierarchičtí a dominantní samec může vzniknout v klecích s více myší. Když spolu s ostatními muži od mladého věku, nebo jako vrhy, šance na agresi jsou minimalizovány.
doporučuje se, aby nebyly společné post-pubertální c57bl / 6 muži s jinými neznámými muži. Hřebci by nikdy neměli být ubytováni u žádného jiného muže a více mužů by nikdy nemělo být umístěno u žádné ženy(žen).,
stres vyvolávající situace (postupy, neznámí správci, nemoci atd.) bude mít tendenci zvyšovat pravděpodobnost agrese. Poskytování obohacování zařízení může snížit agresivní chování; mezi ně patří hnízdní materiál, pastýř chatrče, žvýkací tyčinky, trubky, atd.
-
Q: Proč u myší c57bl / 6 vzniká ulcerózní dermatitida a jak je možné jí zabránit a/nebo léčit?
PD: všechny substráty C57BL / 6 jsou náchylné k rozvoji dermatitidy. Ačkoli genetická příčina není známa,existuje silná environmentální složka.,
výskyt dermatitidy může být minimalizován udržováním stabilního prostředí s konstantní teplotou a relativní vlhkostí mezi 30% a 70%.
jakmile se objeví dermatitida, bylo to historicky obtížné léčit. Novou a velmi účinnou možností řízení je však oříznutí zadních nehtů postižených myší, aby se zabránilo poškrábání a zhoršení stavu, zatímco se uzdraví1. Lokální masti a antibiotika mohou také pomoci zabránit infekci během hojení, ale obecně nejsou účinné samy o sobě.,
-
Q: By chovatel stravy, jako je Purina 5015 chow, protože C57BL/6NTac myši, aby se stal obézní a zobrazení metabolický syndrom?
PD: vysokoenergetické chovatelské diety jsou formulovány se zvýšeným obsahem tuku na podporu postpartum a nepřetržitě chovných samic. Obvykle mají kolem 11% hmotnostních tuku ve srovnání s 5-6% ve standardních prasnicích.
myši c57bl/6NTac jsou při podávání stravy s vysokým obsahem tuku náchylné k rozvoji obezity a inzulínové rezistence vyvolané dietou. Zvýšená adipozita při udržování 11% tukové stravy by nebyla překvapující.
Taconic “ s standard chow je NIH 31m vzorec.,
-
Q: existuje jednoduchý způsob, jak vybrat konkrétní substrain c57bl / 6, který se použije pro metabolické studie?
PD: substráty c57bl / 6N se často doporučují pro metabolické studie; neexistuje však jednoduchý způsob, jak vybrat ten nejlepší pro konkrétní aplikaci.
výkon myš v metabolické studie bude záviset nejen na genetických faktorech, ale také jeho vlastní mikrobiomu profil. Mikrobiom myši se bude lišit podle jeho původu a protokolů chovu.,
nejlepším doporučením je zvolit optimální model založený na ověřovacích studiích, přičemž konkrétní substrain pochází z určitého místa.
-
Q: Jak dobře fungují myši c57bl / 6 pro protokoly vyvolávající stres?
PD: c57bl / 6 myši obecně reagují na stres odlišně od jiných kmenů. I když jsou pravděpodobné rozdíly podvrtnutí, ty nejsou dobře definovány.
V kontrastu k více stresu náchylné kmeny, jako jsou BALB/c a 129S6/Sv, C57BL/6 přítomno více metabolických než behaviorální poruchy v reakci na stresory.,
genderové a cirkadiánní rytmy jsou také pravděpodobně důležitými faktory, kromě socializace a dalších vlivů prostředí. Byly publikovány protokoly chronického stresu validované pro myši c57bl / 66.
-
Q: Jaké faktory způsobují variabilitu růstu nádorů implantovaných u myší C57BL/6?
PD: existuje mnoho faktorů, které mohou ovlivnit růst implantovaných nádorů.,
I když stejný počet buněk jsou implantovány (a mají stejnou úroveň životaschopnosti), přesné umístění štěpu a následné prokrvení může mít drastické dopady na rychlost růstu nádoru. Například tempo růstu nádoru se může lišit o faktor čtyři, v závislosti na tom, zda je implantován více anteriorně nebo posteriorly7.
přesné umístění podkožních štěpů by mělo být zváženo a kontrolováno ve studiích. Věk a počáteční hmotnost zvířete mohou také ovlivnit růst nádoru-doporučil bych objednat myši podle hmotnosti, aby to normalizovaly., Vědci by také měli objednat myši z jednoho místa, aby minimalizovali účinky mikrobiomových rozdílů.
konečně, myši jsou společensky hierarchické a podřízené osoby mohou mít různé úrovně stresu, které mohou ovlivnit imunitní odpovědi a růst nádoru. Obohacování životního prostředí a vhodné aklimatizační a chovatelské podmínky (manipulace, světlo, hluk atd.) může pomoci minimalizovat stres, zejména u mužů.,
Zobrazit Rozhledně Biosciences“ Webinar:
- Nejdůležitější Myš na Světě – Váš Průvodce do C57BL/6 Myší
ke Stažení Rozhledně Biosciences“ White Paper:
- Připravenost na Katastrofy: Možnosti a Prvky, aby Zvážila Při Výběru Linky, aby Zmrazili