Haben Sie Dr. Philip Dubés jüngstes Webinar vermisst, Die wichtigste Maus der Welt – Ihr Leitfaden für die C57BL/6 Maus? Seine Präsentation untersuchte die genetische Vielfalt zwischen C57BL / 6-Substrainen, die Implikationen für GEM-Modelle und den Nutzen der C57BL/6-Maus in Studien zu Stoffwechsel, Immunologie, Onkologie und Verhalten.
Aus Zeitgründen, viele der Fragen Forscher an seine Q&Eine Sitzung ging unbeantwortet., Hier sind alle Fragen, die wir nicht bekommen konnten:
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Q:Wie viele verschiedene C57BL / 6 substrains bietet Taconic Biosciences derzeit?
Dr. Philip Dubá (PD): Taconic bietet zwei verschiedene C57BL/6 substrains, C57BL/6NTac und C57BL/6JBomTac.
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Q: Ist C57BL/6NTac die gleiche wie C57BL/6NJ von Die Jackson Labor?
PD: Taconic“s C57BL/6NTac ist genetisch ähnlich, aber nicht identisch mit dem C57BL/6NJ Belastung.
Beide stammen aus C57BL/6N Embryonen, einmal an den National Institutes of Health (NIH) Tiergenetische Ressource gepflegt., Taconic erhielt diesen Stamm 1991 und das Jackson Laboratory 1997.
Taconic behält die genetische Stabilität aller Inzuchtmausstämme durch Kryokonservierung bei und stellt sicher, dass C57BL/6NTac der ursprünglichen C57BL/6N-Linie, die am NIH aufrechterhalten wird, so ähnlich wie möglich ist.
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F: Wie wichtig ist der genetische Hintergrund im Verhältnis zum Mikrobiomprofil?
PD: Genetische Variationen zwischen C57BL / 6 Substrainen tragen zu multiplen phänotypischen Unterschieden bei., Das Mikrobiom kann jedoch eine ebenso wichtige Rolle bei der Bestimmung mehrerer Merkmale eines Mausstamms spielen, insbesondere der Immun-und Stoffwechselfunktion.
Mäuse, die von verschiedenen Anbietern oder sogar von verschiedenen Standorten desselben Anbieters stammen, können sehr unterschiedliche Mikrobiomprofile haben. Spezifische Beispiele bekannter kommensaler Mikroorganismen mit funktionellen Auswirkungen sind segmentierte filamentöse Bakterien (SFB) und Lactobacillus reuteri1,2.
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Q: Wie oft sollten wir backcross unsere kolonie zu vermeiden genetische drift?,
PD: Wenn Sie eine Kolonie von Wildtyp-C57BL/6-Mäusen halten, empfehlen wir generell, sie mindestens alle vier Generationen durch frischen Bestand zu ersetzen. Wenn Sie eine Kolonie gentechnisch veränderter Mäuse auf einem definierten C57BL/6-Hintergrund verwenden, sollten Sie alle vier bis zehn Generationen eine Rückkreuzung in Betracht ziehen.
Da eine Generation von Backcrossing nur die Hälfte des Genoms ersetzt, wird empfohlen, dies häufiger zu tun, anstatt weniger.
Achten Sie beim Backcrossing darauf, einen definierten Inzucht-Bestand zu verwenden, der mit dem Hintergrund Ihrer Linie identisch ist., Die Verwendung eines ungeeigneten C57BL / 6-Substrains kann zukünftige Studien beeinflussen3, 4.
Wenn Sie sich über den genetischen Hintergrund Ihrer Linie nicht sicher sind, sollten SNP-Tests durchgeführt werden (siehe unten). Eine bessere Option ist es, Embryonen (oder Spermien) aus Ihrer Linie zu kryokonservieren und sie alle zehn Generationen vollständig durch rederived Tiere zu ersetzen. Ein zusätzlicher Vorteil ist die Sicherheit einer Sicherung für Ihre Kolonie bei unvorhergesehenen Umständen (Krankheit, versehentliches Missverständnis, Probleme mit der Einrichtung, Naturkatastrophen usw.).).
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F: Was sind experimentelle Ansätze, um den Substrain zu verifizieren?,
PD: Single Nucleotide polymorphism (SNP) Panel Testing ist eine einfache und wirtschaftliche Möglichkeit, den genetischen Hintergrund Ihrer Mausstämme zu bestimmen.
Substrain Hintergrund kann leicht identifiziert werden mit einem SNP-Panel entwickelt, um C57BL/6 Stämme zu unterscheiden, wie die Maus B6 SNP-Panel von Taconic (sechsundneunzig SNPs insgesamt). Dieses Panel enthält vierundneunzig SNPs, die sich zwischen C57BL/6NTac-und C57BL/6J-Unterläufen unterscheiden.,
Dieses Panel reagiert jedoch weniger empfindlich auf Unterschiede innerhalb von C57BL / 6N-Unterläufen und enthält nur zwei SNPs, die C57BL/6NJ von anderen C57BL/6N-Unterläufen unterscheiden. Bevor Sie ein gezieltes C57BL / 6-SNP-Panel verwenden, sollten Sie bestätigen, dass sich Ihr Stamm auf einem reinen C57BL/6-Hintergrund befindet und keine genetische Kontamination durch andere Stämme aufweist (z. B. 129S6/Sv, FVB oder BALB/c). Die Gesamtdehnungszusammensetzung kann mit umfassenderen SNP-Platten bestimmt werden.
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Q: Wie können sie bestimmen, welche gen(s) verursachen phänotypische unterschiede zwischen verschiedenen C57BL/6 substrains?,
PD: Die Verknüpfungsanalyse genetischer Kreuze zwischen verschiedenen C57BL / 6-Substrainen in Kombination mit SNP-Arrays und der Sequenzierung von ganzen Genomen kann dazu beitragen, mutmaßliche ursächliche Gene für einen bestimmten Phänotyp zu identifizieren. Dieser Ansatz ist jedoch angesichts der begrenzten Anzahl von Markern für die Verknüpfungsanalyse zwischen C57BL/6-Substrainen eine Herausforderung.
Bestätigung der funktionellen Folgen für eine Genvariante würde formal eine gezielte Genbearbeitung auf einem definierten genetischen Hintergrund erfordern., Zum Beispiel wurde die aberrante B-Zellentwicklung im C57BL/6NHsd-Substrain der Dock2m1Hsd-Variante in diesem Manier zugeschrieben3. Vorsicht ist geboten, um nicht genetische Faktoren für Unterschiede zwischen Stämmen wie Mikrobiomeinflüsse auszuschließen.
- Die wichtigste Maus der Welt – Ihr Leitfaden für die C57BL/6 Maus
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F: Wie beeinflusst das Geschlecht die Studienergebnisse bei C57BL/6 Mäusen?
PD: Geschlecht kann große Auswirkungen haben., Abgesehen von offensichtlichen Körpergewicht und hormonelle Unterschiede, C57BL/6 Männer haben unterschiedliche Verhaltens-und Stoffwechseleigenschaften im Vergleich zu C57BL/6 Frauen.
Geschlecht sollte immer im Studiendesign berücksichtigt werden. Das Geschlecht ist eine wichtige biologische Variable, und die Wahl des / der Geschlechter, die in Studien einbezogen werden sollen, sollte wissenschaftlich gerechtfertigt sein. Zum Beispiel verlangt das NIH ab 2015 bei allen Zuschussanträgen, die Tiere in die biomedizinische Forschung einbeziehen, eine Rechtfertigung für die Wahl des Geschlechts.
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Q: Wie können sie reduzieren aggression und kampf verhalten in männlichen C57BL/6 mäuse?,
PD: C57BL / 6 Männchen können mit zunehmendem Alter oder in Stresssituationen immer aggressiver werden. C57BL / 6 Männchen sind hierarchisch und ein dominantes Männchen kann in Käfigen mit mehreren Mäusen auftreten. Wenn sie mit anderen Männern von klein auf oder als Würfe untergebracht werden, werden die Chancen auf Aggression minimiert.
Es wird empfohlen, nicht co-house post-pubertäre C57BL/6 Männer mit anderen unbekannten Männern. Stud Männchen sollten niemals mit einem anderen Mann untergebracht werden, und mehrere Männchen sollten niemals mit einem Weibchen untergebracht werden.,
Stressauslösende Situationen (Verfahren, ungewohnte Hausmeister, Krankheit, etc.) wird dazu neigen, die Wahrscheinlichkeit einer Aggression zu erhöhen. Die Bereitstellung von Anreicherungsgeräten kann aggressives Verhalten reduzieren; Dazu gehören Nistmaterial, Schäferhütten, Kaustöcke, Röhren usw.
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F: Warum entwickeln C57BL / 6-Mäuse eine ulzerative Dermatitis und wie kann sie verhindert und / oder behandelt werden?
PD: Alle C57BL / 6 substrains sind anfällig für Dermatitis. Obwohl eine genetische Ursache unbekannt ist,gibt es eine starke Umweltkomponente.,
Die Inzidenz von Dermatitis kann durch Aufrechterhaltung einer stabilen Umgebung mit konstanter Temperatur und relativer Luftfeuchtigkeit zwischen 30% und 70% minimiert werden.
Sobald Dermatitis präsentiert, dies war historisch schwierig zu behandeln. Eine neue und sehr effektive Managementoption besteht jedoch darin, die hinteren Zehennägel der betroffenen Mäuse zu befestigen, um Kratzer und Verschlimmerung des Zustands während der Heilung zu verhindern. Topische Salben und Antibiotika können auch helfen, Infektionen während der Heilung zu verhindern, sind aber im Allgemeinen nicht allein wirksam.,
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F: Würde eine Züchterdiät wie Purina 5015 chow dazu führen, dass C57BL/6NTac-Mäuse fettleibig werden und ein metabolisches Syndrom aufweisen?
PD: Energiereiche Züchterdiäten werden mit erhöhtem Fett formuliert, um postpartale und kontinuierlich brütende Weibchen zu unterstützen. Typischerweise haben diese etwa 11% Fett nach Gewicht, verglichen mit 5-6% in Standard-Chows.
C57BL / 6NTac Mäuse sind anfällig für Diät-induzierte Fettleibigkeit und Insulinresistenz zu entwickeln, wenn eine fettreiche Diät gefüttert. Erhöhte Adipositas bei einer 11% igen Fettdiät wäre nicht überraschend.
Taconic Standard chow ist die NIH 31M Formel.,
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F: Gibt es eine einfache Möglichkeit, ein bestimmtes C57BL/6-Substrain für Stoffwechselstudien auszuwählen?
PD: C57BL/6 substrains werden oft empfohlen für metabolische Studien; es ist jedoch keine einfache Möglichkeit, zu wählen die beste für eine bestimmte Anwendung.
Die Leistung einer Maus in einer metabolischen Studie hängt nicht nur von genetischen Faktoren ab, sondern auch von ihrem inhärenten Mikrobiomprofil. Das Mikrobiom einer Maus variiert je nach Herkunft und Haltungsprotokollen.,
Die beste Empfehlung ist, ein optimales Modell zu wählen, basierend auf Validierungsstudien, mit einem bestimmten substrain von einem bestimmten Ort bezogen.
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F: Wie gut funktionieren C57BL / 6-Mäuse für stressinduzierende Protokolle?
PD: C57BL / 6 Mäuse reagieren im Allgemeinen anders auf Stress als andere Stämme. Zwar gibt es wahrscheinlich substrain Unterschiede, diese sind nicht gut definiert.
Im Gegensatz zu stressanfälligeren Stämmen wie BALB / c und 129S6 / Sv weist C57BL/6 als Reaktion auf Stressoren mehr metabolische als Verhaltensstörungen auf.,
Geschlecht und zirkadianen Rhythmen sind wahrscheinlich auch wichtige Faktoren, neben Sozialisation und anderen Umwelteinflüssen. Chronischer stress Protokolle validiert für C57BL/6-Mäuse wurden published6.
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Q: Welche faktoren verursachen variabilität in das wachstum von tumoren implantiert in C57BL / 6 mäuse?
PD: Es gibt viele Faktoren, die das Wachstum von implantierten Tumoren beeinflussen können.,
Selbst wenn die gleiche Anzahl von Zellen implantiert werden (und sie haben die gleiche Lebensfähigkeit), die genaue Platzierung des Transplantats und die anschließende Perfusion kann drastische Auswirkungen auf die Rate des Tumorwachstums haben. Beispielsweise kann die Tumorwachstumsrate um den Faktor vier variieren, je nachdem, ob sie anterior oder posterior implantiert wird7.
Die genaue Platzierung von subkutanen Transplantaten sollte in Studien berücksichtigt und kontrolliert werden. Das Alter und das Anfangsgewicht des Tieres können sich auch auf das Tumorwachstum auswirken — ich würde empfehlen, Mäuse nach Gewicht zu bestellen, um dies zu normalisieren., Forscher sollten Mäuse auch von einem einzigen Ort aus bestellen, um die Auswirkungen von Mikrobiomunterschieden zu minimieren.
Schließlich sind Mäuse sozial hierarchisch, und untergeordnete Personen können unterschiedliche Stressniveaus haben, die Immunantworten und Tumorwachstum beeinflussen können. Umweltanreicherung und angemessene Akklimatisierungs-und Haltungsbedingungen (Handhabung, Licht, Lärm usw.) kann helfen, Stress zu minimieren, insbesondere bei Männern.,
- Die wichtigste Maus der Welt – Ihr Leitfaden zur C57BL/6 Maus
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- Katastrophenvorsorge: Die Auswahlmöglichkeiten und Elemente, die bei der Auswahl von Zeilen zur Kryokonservierung zu berücksichtigen sind