nem hiányzik Dr. Philip Dubé legutóbbi webinar, a legfontosabb egér a világon – az útmutató a C57bl/6 egér? Előadásában a c57bl/6 alállomások genetikai sokféleségét, a GEM modellekre gyakorolt hatását, valamint a c57bl / 6 egér hasznosságát vizsgálta az anyagcsere, az immunológia, az onkológia és a viselkedés tanulmányozásában.
az időkorlátok miatt a kutatók számos kérdést nyújtottak be Q&egy munkamenet megválaszolatlan maradt., Íme az összes kérdést nem tudtunk eljutni:
-
K: hány különböző c57bl / 6 alállomások nem Taconic Biosciences jelenleg ajánlat?
Dr. Philip Dubé( PD): a Taconic két különböző c57bl/6 alállomást, a C57BL/6NTac-ot és a c57bl/6JBomTac-ot kínál.
-
k: a C57bl/6NTac ugyanaz, mint a Jackson laboratóriumból származó C57BL / 6NJ?
PD: a Taconic”s c57bl/6NTac genetikailag hasonló, de nem azonos a C57BL/6NJ törzsével.
mindkettő c57bl/6N embrióból származik, amelyet a National Institutes of Health (NIH) állat genetikai erőforrásában tartottak fenn., A Taconic ezt a törzset 1991-ben, a Jackson laboratórium pedig 1997-ben kapta meg.
A Taconic krioprezervációval fenntartja az összes beltenyésztett egér törzs genetikai stabilitását, biztosítva, hogy a C57BL/6NTac a lehető legközelebb álljon az eredeti C57BL / 6N vonalhoz, amelyet a NIH-nál tartanak fenn.
-
k: mennyire fontos a genetikai háttér a mikrobióma profilhoz képest?
PD: a C57bl/6 alállomások közötti genetikai variációk több fenotípusos eltérést eredményeznek., A mikrobiómának azonban ugyanilyen fontos szerepe lehet az egér törzs több jellemzőjének meghatározásában, különösen az immunrendszer és a metabolikus funkcióban.
a különböző gyártókból, vagy akár ugyanazon gyártótól származó különböző helyekről származó egerek nagymértékben eltérő mikrobiómprofilokkal rendelkezhetnek. A funkcionális hatásokkal rendelkező ismert kommenzális mikroorganizmusok speciális példái a szegmentált fonalbaktériumok (SFB) és a Lactobacillus reuteri1,2.
-
K: Milyen gyakran kell visszafelé haladnunk a kolóniánkon, hogy elkerüljük a genetikai sodródást?,
PD: ha a wildtype c57bl / 6 egerek kolóniáját tartja fenn, általában azt javasoljuk, hogy legalább négy generációnként cserélje ki friss állományra. Ha genetikailag módosított egerek kolóniáját használja egy meghatározott c57bl / 6 háttéren, fontolja meg a négy-tíz generáció közötti keresztezést.
mivel a backcrossing egy generációja csak a genom felét helyettesíti,ajánlott ezt gyakrabban, mint kevesebbet.
Ha backcrossing, legyen óvatos, hogy egy meghatározott inbred állomány, amely megegyezik a háttérben a vonal., Nem megfelelő c57bl / 6 alállomás használata hatással lehet a jövőbeli tanulmányokra3, 4.
Ha nem biztos a vonal genetikai hátterében, SNP vizsgálatot kell végezni (lásd alább). Jobb megoldás az embriók (vagy spermiumok) krioprezerválása a vonalból, majd tíz generációnként teljesen újrafogalmazott állatokkal helyettesíteni. Ennek további előnye az, hogy előre nem látható körülmények (betegség, véletlen tévedés, létesítményproblémák, természeti katasztrófák stb.) esetén biztonsági másolatot készíthet a kolóniájáról.).
-
K: mik a kísérleti módszerek az alállomás ellenőrzésére?,
PD: az egy nukleotid polimorfizmus (SNP) panel tesztelése egyszerű és gazdaságos módszer az egér törzseinek genetikai hátterének meghatározására.
alállomás háttér könnyen azonosítható egy SNP panel célja, hogy megkülönböztesse a c57bl / 6 törzsek, mint például az egér B6 SNP Panel Taconic (összesen kilencvenhat SNP). Ez a panel kilencvennégy SNP-t tartalmaz, amelyek különböznek a C57BL/6NTac és a C57BL/6J alállomások között.,
Ez a panel azonban kevésbé érzékeny a c57bl/6N alcsatornákon belüli különbségekre, és csak két SNP-t tartalmaz, amelyek megkülönböztetik a C57BL/6NJ-t a többi C57BL/6N alcsatornától. A célzott C57BL / 6 SNP panel használata előtt meg kell erősítenie, hogy a törzs tiszta c57bl / 6 alapon van, és nincs más törzsek genetikai szennyeződése (pl. 129s6/Sv, FVB vagy BALB/c). Az Általános törzsösszetétel átfogóbb SNP panelekkel határozható meg.
-
K: Hogyan lehet meghatározni, hogy milyen gén(ek) okoznak fenotípusos különbségeket a különböző c57bl/6 alcsatornák között?,
PD: a különböző c57bl/6 alállomások közötti genetikai keresztek összekapcsolása SNP tömbökkel és teljes genom szekvenálással kombinálva segíthet egy adott fenotípus feltételezett okozati génjeinek azonosításában. Ez a megközelítés azonban kihívást jelent, tekintettel a c57bl/6 alállomások közötti kapcsolatelemzéshez szükséges markerek Korlátozott számára.
a genetikai változat funkcionális következményeinek megerősítése formálisan célzott génszerkesztést igényelne egy meghatározott genetikai háttéren., Például a c57bl/6NHsd alállomáson aberráns B-sejtfejlődést a dock2m1hsd változatnak tulajdonították3. Óvatosan kell eljárni, hogy kizárják a nem genetikai tényezőket a törzsek közötti különbségekre, például a mikrobiómákra gyakorolt hatásokra.
tekintse meg a Taconic Biosciences” Webinar:
- a legfontosabb egér a világon – útmutató a c57bl/6 egérhez
-
Q: Hogyan befolyásolja a nemek közötti különbség a vizsgálat eredményeit c57bl/6 egér?
PD: a nemnek jelentős hatása lehet., A nyilvánvaló testtömeg és a hormonális különbségek mellett a c57bl / 6 hímek eltérő viselkedési és metabolikus tulajdonságokkal rendelkeznek a c57bl/6 nőstényekhez képest.
a nemet mindig figyelembe kell venni a tanulmánytervezésben. A nem fontos biológiai változó, és a nem(ek) nek a vizsgálatokba való bevonására vonatkozó választásnak tudományosan indokoltnak kell lennie. Például 2015-től az NIH megköveteli a nemek megválasztásának igazolását minden olyan támogatási kérelemben, amelyben az állatokat orvosbiológiai kutatásba vonják be.
-
K: Hogyan lehet csökkenteni az agressziót és a harci viselkedést férfi c57bl / 6 egerekben?,
PD: a c57bl / 6 hímek életkoruk vagy stresszes helyzetek hatására egyre agresszívebbé válhatnak. A C57BL/6 hímek hierarchikusak, és egy domináns hím több egérrel rendelkező ketrecekben is megjelenhet. Amikor együtt elhelyezett más hímek fiatal korban, vagy littermates, az esélye az agresszió minimalizálható.
javasoljuk, hogy ne társuljon a pubertás utáni c57bl / 6 hímekkel más ismeretlen férfiakkal. A hímeket soha nem szabad más hímekkel együtt elhelyezni, és több hímet soha nem szabad egyetlen nőstény(k) mellett elhelyezni.,
stressz-kiváltó helyzetek (eljárások, ismeretlen gondozók, betegség stb.) inkább növeli az agresszió likelitását. A dúsító eszközök biztosítása csökkentheti az agresszív viselkedést; ezek közé tartozik a fészkelőanyag, a pásztorzsákok, a rágópálcák, a csövek stb.
-
K: miért alakul ki c57bl/6 egérben fekélyes dermatitis, és hogyan lehet megelőzni és / vagy kezelni?
PD: minden C57BL / 6 alcsatorna hajlamos dermatitis kialakulására. Bár a genetikai ok ismeretlen, ennek erős környezeti összetevője van.,
a dermatitisz incidenciája minimalizálható, ha stabil környezetet tart fenn, állandó hőmérsékleten és relatív páratartalom mellett 30-70% között.
amint a dermatitis megjelenik, ezt történelmileg nehéz kezelni. Azonban egy új, nagyon hatékony kezelési lehetőség, hogy klip a hátsó köröm az érintett egerek, hogy megakadályozzák karcolás, súlyosbodása az állapot, miközben heals1. A helyi szalvéta és az antibiotikumok segíthetnek a fertőzés megelőzésében a gyógyulás során, de általában önmagukban nem hatékonyak.,
-
Q: vajon egy tenyésztő étrend, mint például a Purina 5015 chow, a C57BL/6NTac egerek elhízását és metabolikus szindrómát okozna?
PD: a nagy energiájú tenyésztő étrendeket fokozott zsírtartalommal állítják össze, hogy támogassák a szülés utáni és a folyamatosan tenyésztett nőstényeket. Általában ezek körülbelül 11% zsírt tartalmaznak, szemben a standard Chow-k 5-6% – ával.
a c57bl / 6NTac egerek hajlamosak az étrend által kiváltott elhízás és inzulinrezisztencia kialakulására, ha magas zsírtartalmú étrendet táplálnak. A 11% – os zsírtartalmú étrend fenntartása esetén a megnövekedett adipozitás nem lenne meglepő.
Taconic ” s standard chow a NIH 31M formula.,
-
k: van egy egyszerű módja annak, hogy kiválasszunk egy adott c57bl / 6 alállomást, amelyet metabolikus vizsgálatokhoz használunk?
PD: a c57bl / 6N alcsatornákat gyakran ajánlják metabolikus vizsgálatokhoz; azonban nincs egyszerű módja annak, hogy kiválasszuk a legjobbat egy adott alkalmazáshoz.
az egér teljesítménye egy metabolikus vizsgálatban nemcsak a genetikai tényezőktől, hanem a benne rejlő mikrobiómprofiltól is függ. Az egér mikrobióma eredetétől és tartási protokolljaitól függően változik.,
a legjobb ajánlás egy optimális modell kiválasztása validációs vizsgálatok alapján, egy adott alállomással, amely egy adott helyről származik.
-
k: mennyire jól működnek a c57bl / 6 egerek a stressz-indukáló protokollokhoz?
PD: a c57bl / 6 egerek általában eltérően reagálnak a stresszre, mint más törzsek. Bár vannak valószínű alállomások különbségek, ezek nem jól definiált.
a stresszre hajlamosabb törzsekkel, mint például a BALB/c és a 129S6/Sv, a C57BL/6, szemben a stresszorokra adott viselkedésbeli zavarokkal, több metabolikus rendellenességet mutatnak.,
A szocializáció és más környezeti hatások mellett A nemek és a cirkadián ritmusok is fontos tényezők. Közzétették a c57bl/6 egerekre validált krónikus stressz protokollokat6.
-
K: Milyen tényezők okoznak variabilitást a c57bl/6 egerekbe beültetett daganatok növekedésében?
PD: számos tényező befolyásolhatja a beültetett daganatok növekedését.,
még akkor is, ha ugyanannyi sejtet ültetnek be (és ugyanolyan életképességgel rendelkeznek), a graft pontos elhelyezése és az azt követő perfúzió drasztikus hatással lehet a tumor növekedésének sebességére. Például a tumor növekedési üteme négy tényezővel változhat attól függően, hogy anterior vagy uteriorly beültetett-E7.
a subcutan graftok pontos elhelyezését a vizsgálatok során figyelembe kell venni és ellenőrizni kell. Az állat kora és kiindulási súlya szintén befolyásolhatja a tumor növekedését — azt javaslom, hogy az egereket súly szerint rendelje meg ennek normalizálása érdekében., A kutatóknak egyetlen helyről is meg kell rendelniük az egereket, hogy minimalizálják a mikrobiom különbségek hatásait.
végül, az egerek társadalmilag hierarchikusak, és az alárendelt egyéneknek különböző szintű stresszük lehet, ami befolyásolhatja az immunválaszt és a tumor növekedését. Környezeti dúsítás, megfelelő akklimatizáció és tartási feltételek (kezelés, fény, zaj stb.) segíthet a stressz minimalizálásában, különösen férfiaknál.,
Nézet a Taconic Biosciences” Webinar:
- A Legfontosabb az Egér a Világon – A vezetőd, hogy a C57BL/6 Egér
Töltse le a Taconic Biosciences” Fehér könyv:
- Katasztrófa Felkészültség: A Döntéseket Elemeket kell figyelembe venni, Amikor Kiválasztja a Sorok, hogy Cryopreserve