Ti sei perso il recente webinar del Dr. Philip Dubé, il mouse più importante del mondo – La tua guida al mouse C57BL/6? La sua presentazione ha esplorato la diversità genetica tra i substreni C57BL / 6, le implicazioni per i modelli GEM e l’utilità del topo C57BL/6 negli studi su metabolismo, immunologia, oncologia e comportamento.
A causa di vincoli di tempo, molte delle domande che i ricercatori hanno presentato al suo Q& Una sessione è rimasta senza risposta., Ecco tutte le domande a cui non siamo riusciti a rispondere:
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D: Quanti diversi substrati C57BL/6 offre attualmente Taconic Biosciences?
Dr. Philip Dubé (PD): Taconic offre due diversi substrain C57BL/6, C57BL/6NTac e C57BL / 6JBomTac.
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D: C57BL / 6NTac è uguale a C57BL / 6NJ del laboratorio Jackson?
PD: Il ceppo C57BL/6NTac di Taconic è geneticamente simile, ma non identico al ceppo C57BL / 6NJ.
Entrambi sono derivati da embrioni C57BL/6N, una volta mantenuti presso il National Institutes of Health (NIH) Animal Genetic Resource., Taconic ha ricevuto questo ceppo nel 1991 e il Laboratorio di Jackson ha ricevuto il loro nel 1997.
Taconic mantiene la stabilità genetica di tutti i ceppi di topo inbred attraverso la crioconservazione, assicurando che C57BL/6NTac sia il più simile possibile alla linea originale C57BL/6N mantenuta al NIH.
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D: Quanto è importante il background genetico rispetto al profilo del microbioma?
PD: Le variazioni genetiche tra i substreni C57BL / 6 contribuiscono a differenze fenotipiche multiple., Tuttavia, il microbioma può avere un ruolo altrettanto importante nel determinare le caratteristiche multiple di un ceppo di topo, in particolare la funzione immunitaria e metabolica.
I topi provenienti da diversi fornitori, o anche da luoghi diversi dallo stesso fornitore, possono avere profili microbiome molto diversi. Esempi specifici di microrganismi commensali noti con impatti funzionali includono batteri filamentosi segmentati (SFB) e Lactobacillus reuteri1,2.
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D: Quanto spesso dovremmo attraversare la nostra colonia per evitare la deriva genetica?,
PD: Se si mantiene una colonia di topi wildtype C57BL / 6, in genere si consiglia di sostituirlo con uno stock fresco almeno ogni quattro generazioni. Se si utilizza una colonia di topi geneticamente modificati su uno sfondo C57BL/6 definito, considerare il backcrossing ogni quattro-dieci generazioni.
Poiché una generazione di backcrossing sostituisce solo la metà del genoma, si raccomanda di farlo più frequentemente piuttosto che meno.
Quando si esegue il backcrossing, fare attenzione a utilizzare uno stock inbred definito identico allo sfondo della linea., L’uso di un sottostrain C57BL/6 inappropriato può influire sugli studi futuri3,4.
Se non sei sicuro del background genetico della tua linea, è necessario eseguire il test SNP (vedi sotto). Un’opzione migliore è quella di crioconservare embrioni (o spermatozoi) dalla linea e sostituirlo completamente con animali rederived ogni dieci generazioni. Un ulteriore vantaggio a questo è la sicurezza di avere un backup per la tua colonia in caso di circostanze impreviste (malattia, disallineamento accidentale, problemi di struttura, disastri naturali, ecc.).
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D: Quali sono gli approcci sperimentali per verificare il sottostrain?,
PD: Single nucleotide polymorphism (SNP) panel testing è un modo semplice ed economico per determinare il background genetico dei ceppi di topo.
Lo sfondo del sottostrain può essere facilmente identificato utilizzando un pannello SNP progettato per differenziare i ceppi C57BL/6, come il pannello SNP del mouse B6 da Taconic (novantasei SNP in totale). Questo pannello include novantaquattro SNP che differiscono tra i substreni C57BL/6NTac e C57BL/6J.,
Tuttavia, questo pannello è meno sensibile alle differenze all’interno dei substrati C57BL/6N e include solo due SNP che differenziano C57BL/6NJ dagli altri substrati C57BL/6N. Prima di utilizzare un pannello SNP C57BL/6 mirato, è necessario confermare che il ceppo si trova su uno sfondo C57BL/6 puro e non presenta contaminazioni genetiche da altri ceppi (ad esempio 129S6/Sv, FVB o BALB/c). La composizione complessiva della deformazione può essere determinata utilizzando pannelli SNP più completi.
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D: Come si può determinare quali geni stanno causando differenze fenotipiche tra i diversi substreni C57BL/6?,
PD: l’analisi del legame di incroci genetici tra diversi substreni C57BL / 6, in combinazione con array SNP e sequenziamento dell’intero genoma, può aiutare a identificare i geni causativi putativi per un dato fenotipo. Questo approccio è impegnativo, tuttavia, dato il numero limitato di marcatori per l’analisi del legame tra substreni C57BL/6.
La conferma delle conseguenze funzionali per una variante genetica richiederebbe formalmente l’editing genetico mirato su un background genetico definito., Ad esempio, lo sviluppo aberrante delle cellule B nel sottoservello C57BL/6NHsd è stato attribuito alla variante Dock2m1Hsd in questo maniero3. Si deve prestare attenzione per escludere fattori non genetici per le differenze tra i ceppi, come le influenze del microbioma.
Visualizza il Webinar di Taconic Biosciences:
- Il mouse più importante del mondo – La tua guida al mouse C57BL/6
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D: In che modo il genere influisce sui risultati dello studio Topi C57BL/6?
PD: Il genere può avere un impatto importante., A parte il peso corporeo evidente e le differenze ormonali, i maschi C57BL/6 hanno diverse proprietà comportamentali e metaboliche rispetto alle femmine C57BL/6.
Il genere dovrebbe sempre essere considerato nella progettazione dello studio. Il genere è un’importante variabile biologica e la scelta del genere da includere negli studi dovrebbe essere scientificamente giustificata. Ad esempio, a partire dal 2015, il NIH richiede una giustificazione per la scelta del genere in tutte le domande di sovvenzione che coinvolgono animali nella ricerca biomedica.
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D: Come puoi ridurre l’aggressività e il comportamento di combattimento nei topi maschi C57BL/6?,
PD: I maschi C57BL/6 possono diventare sempre più aggressivi man mano che invecchiano o quando sono sottoposti a situazioni stressanti. I maschi C57BL/6 sono gerarchici e un maschio dominante può sorgere in gabbie con più topi. Quando co-ospitato con altri maschi da una giovane età, o come littermates, le probabilità di aggressione sono ridotti al minimo.
Si raccomanda di non co-house post-puberale C57BL/6 maschi con altri maschi non familiari. Stud maschi non dovrebbero mai essere alloggiati con qualsiasi altro maschio, e più maschi non dovrebbero mai essere alloggiati con qualsiasi femmina(s).,
Situazioni che inducono stress (procedure, custodi non familiari, malattia, ecc.) tenderà ad aumentare la probabilità di aggressione. Fornire dispositivi di arricchimento può ridurre i comportamenti aggressivi; questi includono materiale di nidificazione, baracche da pastore, bastoncini da masticare, tubi, ecc.
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D: Perché i topi C57BL/6 sviluppano dermatite ulcerosa e come può essere prevenuta e/o trattata?
PD: Tutti i substreni C57BL / 6 sono soggetti a sviluppare dermatiti. Sebbene una causa genetica sia sconosciuta, c’è una forte componente ambientale in questo.,
L’incidenza della dermatite può essere minimizzata mantenendo un ambiente stabile con temperatura costante e umidità relativa tra il 30% e il 70%.
Una volta che la dermatite presenta, questo è stato storicamente difficile da trattare. Tuttavia, una nuova e molto efficace opzione di gestione è quella di tagliare le unghie posteriori dei topi colpiti per evitare graffi e aggravamento della condizione mentre guarisce1. Pomate e antibiotici topici possono anche aiutare a prevenire l’infezione durante la guarigione, ma generalmente non sono efficaci da soli.,
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Q: Una dieta dell’allevatore, quale Purina 5015 chow, causerebbe i topi di C57BL/6NTac diventare obesi e visualizzare la sindrome metabolica?
PD: Le diete dell’allevatore ad alta energia sono formulate con grasso aumentato per sostenere le femmine post-partum e continuamente riproduttrici. In genere, questi hanno circa l ‘ 11% di grassi in peso, rispetto al 5-6% nei chow standard.
I topi C57BL/6NTac sono inclini a sviluppare obesità indotta dalla dieta e insulino-resistenza quando alimentati con una dieta ricca di grassi. L’aumento dell’adiposità se mantenuto con una dieta grassa dell ‘ 11% non sarebbe sorprendente.
Il chow standard di Taconic è la formula NIH 31M.,
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D: Esiste un modo semplice per selezionare uno specifico sottostrain C57BL / 6 da utilizzare per gli studi metabolici?
PD: I substreni C57BL / 6N sono spesso raccomandati per gli studi metabolici; tuttavia, non esiste un modo semplice per scegliere quello migliore per una specifica applicazione.
Le prestazioni di un topo in uno studio metabolico non dipenderanno solo da fattori genetici, ma anche dal suo profilo intrinseco del microbioma. Il microbioma di un topo varierà in base alla sua origine e ai protocolli di allevamento.,
La migliore raccomandazione è quella di scegliere un modello ottimale basato su studi di validazione, con un sottotreno specifico proveniente da una posizione specifica.
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Q: Quanto bene fare C57BL / 6 topi di lavoro per lo stress che inducono protocolli?
PD: I topi C57BL / 6 in generale rispondono allo stress in modo diverso da altri ceppi. Mentre ci sono probabilmente differenze di sottostrain, queste non sono ben definite.
In contrasto con ceppi più inclini allo stress, come BALB/c e 129S6/Sv, C57BL/6 presenta più disturbi metabolici rispetto ai disturbi comportamentali in risposta ai fattori di stress.,
Anche il genere e i ritmi circadiani sono probabilmente fattori importanti, oltre alla socializzazione e ad altre influenze ambientali. Sono stati pubblicati protocolli di stress cronico convalidati per topi C57BL / 66.
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D: Quali fattori causano variabilità nella crescita dei tumori impiantati nei topi C57BL/6?
PD: Ci sono molti fattori che possono influenzare la crescita dei tumori impiantati.,
Anche se viene impiantato lo stesso numero di cellule (e hanno lo stesso livello di vitalità), l’esatto posizionamento dell’innesto e la successiva perfusione possono avere impatti drastici sul tasso di crescita del tumore. Ad esempio, il tasso di crescita del tumore può variare di un fattore quattro a seconda che venga impiantato più anteriormente o posterioremente7.
L ‘ esatta collocazione degli innesti sottocutanei deve essere considerata e controllata negli studi. L’età e il peso iniziale dell’animale possono anche influire sulla crescita del tumore — consiglierei di ordinare i topi in base al peso per normalizzarlo., I ricercatori dovrebbero anche ordinare topi da una singola posizione per ridurre al minimo gli effetti delle differenze di microbioma.
Infine, i topi sono socialmente gerarchici e gli individui subordinati possono avere diversi livelli di stress che possono influenzare le risposte immunitarie e la crescita del tumore. Arricchimento ambientale e condizioni di acclimatazione e allevamento appropriate (manipolazione, luce,rumore, ecc.) può aiutare a ridurre al minimo lo stress, in particolare nei maschi.,
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