Webinarium Q – A – Twój przewodnik po myszy C57BL/6

czy przegapiłeś Ostatnie webinarium Dr. Philipa Dubé, najważniejsza Mysz na świecie-Twój przewodnik po myszy C57BL/6? Jego prezentacja dotyczyła różnorodności genetycznej wśród podstrain C57BL / 6, implikacji dla modeli GEM oraz użyteczności myszy C57BL/6 w badaniach metabolizmu, immunologii, onkologii i zachowania.
ze względu na ograniczenia czasowe wiele pytań, które badacze przedłożyli do jego Q&sesja pozostała bez odpowiedzi., Oto wszystkie pytania, na które nie mogliśmy odpowiedzieć:

• p: ile różnych podstron C57BL/6 oferuje obecnie Taconic Biosciences?

dr Philip Dubé (PD): Taconic oferuje dwa różne podst. C57BL/6, C57BL / 6ntac i C57BL / 6jbomtac.

• p: czy C57BL/6ntac to to samo co C57BL / 6NJ z laboratorium Jacksona?

PD: C57BL/6ntac Taconic jest genetycznie podobny, ale nie identyczny ze szczepem C57BL / 6NJ.
oba pochodzą z zarodków C57BL / 6N, niegdyś przechowywanych w zwierzęcym zasobie genetycznym National Institutes of Health (NIH)., Taconic otrzymał ten szczep w 1991 roku, a Jackson Laboratory otrzymał ich w 1997 roku.
Taconic utrzymuje stabilność genetyczną wszystkich rasowych szczepów myszy poprzez krioprezerwację, zapewniając, że C57BL / 6NTac jest jak najbardziej podobny do oryginalnej linii C57BL / 6N utrzymywanej w NIH.

• p: jak ważne jest tło genetyczne w stosunku do profilu mikrobiomu?

PD: różnice genetyczne pomiędzy podplemieniami C57BL / 6 przyczyniają się do wielu różnic fenotypowych., Jednak mikrobiom może mieć równie ważną rolę w określaniu wielu cech szczepu myszy, w szczególności funkcji immunologicznej i metabolicznej.
myszy pochodzące od różnych dostawców, a nawet z różnych lokalizacji od tego samego dostawcy, mogą mieć znacznie różne profile mikrobiomu. Konkretne przykłady znanych mikroorganizmów komensalnych o oddziaływaniu funkcjonalnym obejmują segmentowane bakterie nitkowate (SFB) i Lactobacillus reuteri1,2.

• p: jak często powinniśmy przemierzać naszą kolonię, aby uniknąć dryfu genetycznego?,

PD: jeśli utrzymujesz kolonię myszy wildtype C57BL / 6, zalecamy wymianę jej na świeżą co najmniej co cztery pokolenia. Jeśli używasz Kolonii genetycznie zmodyfikowanych myszy na zdefiniowanym tle C57BL / 6, rozważ cofanie się co cztery do dziesięciu pokoleń.
ponieważ jedna generacja backcrossingu zastępuje tylko połowę genomu, zaleca się to robić częściej niż rzadziej.
podczas backcrossingu należy uważać, aby użyć zdefiniowanego zapasu inbredowego, który jest identyczny z tłem linii., Stosowanie niewłaściwego podzespołu C57BL / 6 może mieć wpływ na przyszłe badania3,4.

W przypadku wątpliwości co do tła genetycznego linii należy wykonać badanie SNP (patrz niżej). Lepszą opcją jest krioprezerwacja embrionów (lub plemników) z twojej linii i całkowite zastąpienie ich czerwonymi zwierzętami co dziesięć pokoleń. Dodatkową zaletą jest bezpieczeństwo posiadania kopii zapasowej Kolonii w przypadku nieprzewidzianych okoliczności (choroby, przypadkowe niedopasowanie, problemy z obiektami, klęski żywiołowe itp.).

• p: Jakie są metody eksperymentalne w celu weryfikacji podpory?,

PD: testowanie panelowe polimorfizmu pojedynczego nukleotydu (SNP) jest prostym i ekonomicznym sposobem określenia tła genetycznego szczepów myszy.
podłoże podporowe można łatwo zidentyfikować za pomocą panelu SNP zaprojektowanego do odróżnienia szczepów C57BL / 6, np. Panel SNP myszy B6 od Taconic (łącznie dziewięćdziesiąt sześć SNP). Ten panel zawiera dziewięćdziesiąt cztery SNP, które różnią się między C57BL/6ntac i C57BL / 6j podstrain.,
jednak ten panel jest mniej wrażliwy na różnice w obrębie podstrain C57BL/6N i zawiera tylko dwa SNP, które odróżniają C57BL / 6NJ od innych podstrain C57BL/6N. Przed użyciem ukierunkowanego panelu C57BL / 6 SNP, należy potwierdzić, że szczep jest na czystym tle C57BL/6 i nie ma skażenia genetycznego innymi szczepami (np. 129S6/Sv, FVB lub BALB/c). Ogólny skład szczepu można określić za pomocą bardziej kompleksowych paneli SNP.

• p: jak można określić, jaki Gen(Y) powoduje różnice fenotypowe między różnymi podstrainami C57BL/6?,

PD: Analiza powiązań genetycznych krzyżówek między różnymi podstrainami C57BL/6, w połączeniu z tablicami SNP i sekwencjonowaniem całego genomu, może pomóc w identyfikacji domniemanych genów przyczynowych dla danego fenotypu. Podejście to jest jednak trudne, biorąc pod uwagę ograniczoną liczbę markerów do analizy powiązań między podstrainami C57BL / 6.
potwierdzenie funkcjonalnych konsekwencji dla wariantu genetycznego wymagałoby formalnie ukierunkowanej edycji genu na określonym tle genetycznym., Na przykład, nieprawidłowy rozwój komórek B w podszyciu C57BL / 6NHsd przypisano wariantowi Dock2m1Hsd w tym manner3. Należy zachować ostrożność w celu wykluczenia czynników genetycznych dla różnic między szczepami, takich jak wpływ mikrobiomu.

Zobacz webinarium Taconic Biosciences:

• najważniejsza Mysz na świecie – Twój przewodnik po myszy C57BL/6

• myszy C57BL/6?

PD: płeć może mieć duży wpływ., Oprócz oczywistej masy ciała i różnic hormonalnych, samce C57BL/6 mają inne właściwości behawioralne i metaboliczne w porównaniu do samic C57BL/6.

płeć powinna być zawsze brana pod uwagę w projekcie badania. Płeć jest ważną zmienną biologiczną, a wybór płci do włączenia do badań powinien być naukowo uzasadniony. Na przykład od 2015 r. NIH wymaga uzasadnienia wyboru płci we wszystkich wnioskach o dotacje obejmujących zwierzęta w badaniach biomedycznych.

• p: Jak zmniejszyć agresję i zachowania bojowe u samców myszy C57BL/6?,

PD: C57BL / 6 samce mogą stać się coraz bardziej agresywne z wiekiem lub w sytuacjach stresowych. C57BL / 6 samce są hierarchiczne, a dominujący samiec może pojawić się w klatkach z wieloma myszami. Gdy współwystępuje z innymi samcami od najmłodszych lat lub jako małoletni, szanse na agresję są zminimalizowane.
nie zaleca się współżycia po okresie dojrzewania C57BL/6 samców z innymi nieznanymi samcami. Samce stadne nigdy nie powinny być trzymane z żadnym innym samcem, a wiele samców nigdy nie powinno być trzymanych z żadną samicą (- ami).,
sytuacje wywołujące stres (procedury, nieznani opiekunowie, choroby itp.) będą miały tendencję do zwiększania podobieństwa agresji. Zapewnienie urządzeń wzbogacających może zmniejszyć agresywne zachowania; obejmują one Materiał lęgowy, szałasy pasterskie, pałeczki do żucia, rurki itp.

• p: dlaczego u myszy C57BL/6 rozwija się wrzodziejące zapalenie skóry i jak można temu zapobiec i/lub leczyć?

PD: wszystkie podst.C57BL / 6 są podatne na rozwój zapalenia skóry. Chociaż przyczyna genetyczna nie jest znana, istnieje silny składnik środowiskowy.,
częstość występowania zapalenia skóry można zminimalizować, utrzymując stabilne środowisko o stałej temperaturze i wilgotności względnej od 30% do 70%.
po wystąpieniu zapalenia skóry było to historycznie trudne do wyleczenia. Jednak nową i bardzo skuteczną opcją zarządzania jest przycinanie tylnych paznokci dotkniętych myszy, aby zapobiec drapaniu i pogorszeniu stanu, podczas gdy leczy1. Miejscowe maści i antybiotyki mogą również pomóc w zapobieganiu infekcji podczas gojenia, ale na ogół nie są skuteczne sam.,

• p: czy dieta hodowcy, taka jak Purina 5015 chow, spowoduje otyłość myszy C57BL/6ntac i objawy zespołu metabolicznego?

PD: wysokoenergetyczne diety hodowców są formułowane ze zwiększonym tłuszczem, aby wspierać samice po porodzie i stale rozmnażające się. Zazwyczaj mają one około 11% tłuszczu wagowego, w porównaniu do 5-6% w standardowych chowach.
myszy C57BL/6ntac są podatne na rozwój otyłości indukowanej dietą i insulinooporności podczas karmienia dietą wysokotłuszczową. Zwiększona otyłość, gdy utrzymywana jest na diecie 11% tłuszczu, nie byłaby zaskoczeniem.

standardowym chow Taconic jest wzór NIH 31M.,

• p: czy istnieje prosty sposób na wybranie konkretnego podst. C57BL / 6 do wykorzystania w badaniach metabolicznych?

PD: podprogramy C57BL / 6N są często zalecane do badań metabolicznych, jednak nie ma prostego sposobu na wybór najlepszego dla konkretnego zastosowania.
wydajność myszy w badaniu metabolicznym będzie zależeć nie tylko od czynników genetycznych, ale także od jej właściwego profilu mikrobiomu. Mikrobiom myszy będzie się różnić w zależności od jego pochodzenia i protokołów hodowli.,
najlepszą rekomendacją jest wybór optymalnego modelu na podstawie badań walidacyjnych, z konkretnym podłożem pochodzącym z konkretnej lokalizacji.

• p: jak dobrze działają myszy C57BL / 6 dla protokołów wywołujących stres?

PD: C57BL / 6 myszy ogólnie reagują na stres inaczej niż inne szczepy. Chociaż istnieją prawdopodobne różnice podciągowe, nie są one dobrze zdefiniowane.
W przeciwieństwie do bardziej podatnych na stres szczepów, takich jak BALB/c i 129S6/Sv, C57BL / 6 wykazują więcej zaburzeń metabolicznych niż behawioralnych w odpowiedzi na stresory.,
płeć i rytmy dobowe są również prawdopodobnie ważnymi czynnikami, oprócz socjalizacji i innych wpływów środowiskowych. Opublikowano protokoły chronicznego stresu zatwierdzone dla myszy C57BL/66.

• p: Jakie czynniki powodują zmienność wzrostu guzów wszczepionych u myszy C57BL/6?

PD: istnieje wiele czynników, które mogą wpływać na wzrost wszczepionych guzów.,
nawet jeśli wszczepiona jest ta sama liczba komórek (i mają ten sam poziom żywotności), dokładne umiejscowienie przeszczepu i późniejsza perfuzja mogą mieć drastyczny wpływ na tempo wzrostu guza. Na przykład tempo wzrostu guza może różnić się czterokrotnie w zależności od tego, czy jest on wszczepiany bardziej przednio czy tylnie7.
w badaniach należy rozważyć i kontrolować dokładne umiejscowienie przeszczepów podskórnych. Wiek i początkowa waga zwierzęcia może również wpływać na wzrost guza-zalecałbym zamawianie myszy według wagi, aby to normalizować., Naukowcy powinni również zamawiać myszy z jednego miejsca, aby zminimalizować skutki różnic w mikrobiomie.
wreszcie, myszy są społecznie hierarchiczne, a podporządkowane osoby mogą mieć różne poziomy stresu, które mogą wpływać na reakcje immunologiczne i wzrost guza. Wzbogacenie środowiska oraz odpowiednie warunki aklimatyzacji i hodowli (obsługa, światło, hałas itp.) może pomóc zminimalizować stres, szczególnie u mężczyzn.,

Zobacz webinarium Taconic Biosciences:

• najważniejsza Mysz na świecie – Twój przewodnik po myszy C57BL/6