missade du Dr Philip Dubé”s senaste webinar, Den Viktigaste Musen i Världen – Din Guide till C57BL/6 Musen? Hans presentation undersökt den genetiska mångfalden bland C57BL/6 substrains, konsekvenser för GEM modeller, och nyttan av C57BL/6 musen i studier av metabolism, immunologi, onkologi och beteende.
på grund av tidsbegränsningar lämnade många av de frågor som forskarna skickade till sin Q& en session gick obesvarad., Här är alla frågor som vi inte kunde komma till:
-
Q: Hur många olika C57BL / 6-substrat erbjuder Taconic Biosciences för närvarande?
Dr. Philip Dubé (PD): Taconic erbjuder två olika C57BL/6 substrains, C57BL/6NTac och C57BL/6JBomTac.
-
Q: Är C57BL/6NTac samma som C57BL/6NJ från Jackson Laboratory?
PD: Taconic”s C57BL/6NTac är genetiskt likartad men inte identisk med C57BL / 6NJ-stammen.
Både härrör från C57BL/6N embryon, en gång kvar på National Institutes of Health (NIH) Djurens Genetiska Resurser., Taconic fick denna stam 1991, och Jackson Laboratory mottog deras 1997.
Taconic upprätthåller den genetiska stabiliteten hos alla inavlade musstammar genom kryopreservering, vilket säkerställer att C57BL/6NTac är så likartad som möjligt som den ursprungliga C57BL / 6N-linjen som upprätthålls vid NIH.
-
F: hur viktigt är genetisk bakgrund i förhållande till microbiome profil?
PD: genetiska variationer mellan C57BL/6 substrainer bidrar till flera fenotypiska skillnader., Mikrobiomen kan emellertid ha en lika viktig roll för att bestämma flera egenskaper hos en musstam, framför allt immun-och metabolisk funktion.
möss som kommer från olika leverantörer, eller till och med från olika platser från samma leverantör, kan ha väldigt olika mikrobiomeprofiler. Specifika exempel på kända commensala mikroorganismer med funktionella effekter inkluderar segmenterade filamentösa bakterier (SFB) och Lactobacillus reuteri1,2.
-
F: Hur ofta ska vi korsa vår koloni för att undvika genetisk drift?,
PD: om du upprätthåller en koloni av wildtype C57BL / 6-möss rekommenderar vi att du byter ut den med färskt lager minst var fjärde generation. Om du använder en koloni av genetiskt konstruerade möss på en definierad C57BL/6-bakgrund, överväga backcrossing var fjärde till tio generationer.
eftersom en generation av backcrossing bara ersätter hälften av genomet, rekommenderas det att göra detta oftare snarare än mindre.
när backcrossing, var försiktig med att använda ett definierat inavlat lager som är identiskt med bakgrunden på din linje., Användning av ett olämpligt C57BL / 6-substrat kan påverka framtida studier3, 4.
om du är osäker på den genetiska bakgrunden av din linje, bör SNP-testning utföras (se nedan). Ett bättre alternativ är att cryopreservera embryon (eller spermier) från din linje och helt ersätta den med återupptagna djur var tionde generation. En extra fördel med detta är säkerheten för att ha en säkerhetskopia för din koloni vid oförutsedda omständigheter (sjukdom, oavsiktlig misshandel, anläggningsfrågor, naturkatastrofer etc.).
-
Q: Vad är experimentella metoder för att verifiera substrain?,
PD: Single nucleotid polymorphism (SNP) panel testing är ett enkelt och ekonomiskt sätt att bestämma den genetiska bakgrunden av dina musstammar.
Substrain bakgrund kan lätt identifieras med hjälp av en SNP-panelen utformad för att skilja C57BL/6 stammar, såsom Mus B6 SNP-Panel från Taconic (nittiosex Snp totalt). Denna panel innehåller nittio-fyra Snp som skiljer sig mellan C57BL/6NTac och C57BL/6J substrains.,
Men den här panelen är mindre känsliga för skillnader inom C57BL/6N substrains, och innehåller bara två Snp som skiljer C57BL/6NJ från andra C57BL/6N substrains. Innan du använder en riktad C57BL/6 SNP-panel, du bör bekräfta att din stam är på en ren C57BL/6 bakgrund och inte har genetisk förorening från andra stammar (t ex 129S6/Sv, FVB eller BALB/c). Övergripande stamkomposition kan bestämmas med hjälp av mer omfattande SNP-paneler.
-
F: Hur kan du bestämma vilken(a) gen (er) som orsakar fenotypiska skillnader mellan olika C57BL / 6-substrat?,
PD: länkanalys av genetiska korsningar mellan olika C57BL / 6-substrainer, i kombination med SNP-arrayer och helgenomsekvensering, kan bidra till att identifiera förmodade orsakande gener för en given fenotyp. Detta tillvägagångssätt är emellertid utmanande med tanke på det begränsade antalet markörer för länkanalys mellan C57BL/6-substrat.
bekräftelse av de funktionella konsekvenserna för en genetisk variant skulle formellt kräva riktad genredigering på en definierad genetisk bakgrund., Till exempel, avvikande B-cell utveckling i C57BL/6NHsd substrain var hänföras till Dock2m1Hsd variant på detta manner3. Försiktighet bör vidtas för att utesluta icke-genetiska faktorer för skillnader mellan stammar, såsom mikrobiome influenser.
Visa Taconic Biosciences” Webinar:
- den viktigaste musen i världen – din Guide till C57BL/6 mus
-
Q: Hur påverkar kön studieresultat i C57BL/6 möss?
PD: kön kan ha stor inverkan., Bortsett från uppenbara kroppsvikt och hormonella skillnader, C57BL/6 män har olika beteendemässiga och metaboliska egenskaper jämfört med C57BL/6 kvinnor.
kön bör alltid beaktas i studiedesign. Kön är en viktig biologisk variabel, och valet av kön som ska ingå i studier bör vara vetenskapligt motiverat. Från och med 2015 kräver NIH till exempel motivering för valet av kön i alla bidragsansökningar som rör djur i biomedicinsk forskning.
-
F: Hur kan du minska aggression och kampbeteende hos manliga C57BL/6 möss?,
PD: C57BL/6 män kan bli alltmer aggressiva när de åldras eller när de utsätts för stressiga situationer. C57BL / 6 män är hierarkiska och en dominerande man kan uppstå i burar med flera möss. När de hålls tillsammans med andra män från ung ålder, eller som kullar, minimeras risken för aggression.
det rekommenderas att inte Co-house post-pubertal C57BL / 6 män med andra obekanta män. Stud hanar bör aldrig inrymmas med någon annan hane, och flera hanar bör aldrig inrymmas med någon kvinna(s).,
stressinducerande situationer (procedurer, okända vårdgivare, sjukdom etc.) tenderar att öka aggressionens likhet. Att tillhandahålla anrikning enheter kan minska aggressiva beteenden; dessa inkluderar häckande material, shepherd shacks, tugga pinnar, rör, etc.
-
f: varför utvecklar C57BL / 6-möss ulcerös dermatit och hur kan det förebyggas och/eller behandlas?
PD: alla C57BL/6-substrat är benägna att utveckla dermatit. Även om en genetisk orsak är okänd finns det en stark miljökomponent till detta.,
dermatit incidensen kan minimeras genom att upprätthålla en stabil miljö med konstant temperatur och relativ fuktighet mellan 30% och 70%.
när dermatit presenterar har detta historiskt varit svårt att behandla. Ett nytt och mycket effektivt hanteringsalternativ är dock att klämma de bakre tånaglarna hos de drabbade mössen för att förhindra repor och förvärring av tillståndet medan det läker1. Aktuella salvor och antibiotika kan också bidra till att förhindra infektion under läkning, men är i allmänhet inte effektiva ensamma.,
-
Q: Skulle en uppfödare kost, såsom Purina 5015 chow, orsaka C57BL/6NTac möss för att bli feta och visa metabola syndromet?
PD: hög energi uppfödare dieter formuleras med ökat fett för att stödja post-partum och kontinuerligt avel Honor. Vanligtvis har dessa cirka 11% fett i vikt, jämfört med 5-6% i standard chows.
C57BL / 6NTac-möss är benägna att utveckla dietinducerad fetma och insulinresistens när de matas med en hög fetthalt. Ökad adipositet när den upprätthålls på en 11% fettdiet skulle inte vara överraskande.
Taconic”s standard chow är NIH 31M formel.,
-
Q: finns det ett enkelt sätt att välja ett specifikt C57BL / 6-substrat att använda för metaboliska studier?
PD: C57BL/6N substrains rekommenderas ofta för metaboliska studier; Det finns dock inget enkelt sätt att välja det bästa för en specifik applikation.
en muss prestanda i en metabolisk studie beror inte bara på genetiska faktorer utan även dess inneboende mikrobiomeprofil. Mikrobiomen hos en mus kommer att variera beroende på dess ursprung och djurhållningsprotokoll.,
den bästa rekommendationen är att välja en optimal modell baserad på valideringsstudier, med en specifik substrain som kommer från en viss plats.
-
F: Hur bra fungerar C57BL/6-möss för stressinducerande protokoll?
PD: C57BL/6 möss svarar i allmänhet på stress annorlunda än andra stammar. Även om det finns sannolika substrainskillnader är dessa inte väldefinierade.
i motsats till mer stressbenägna stammar, såsom BALB/c och 129S6/Sv, C57BL/6 uppvisar mer metaboliska än beteendestörningar som svar på stressorer.,
kön och dygnsrytmer är också sannolika viktiga faktorer, förutom socialisering och andra miljöpåverkan. Kroniska stressprotokoll validerade för C57BL / 6 möss har publicerats6.
-
Q: Vilka faktorer orsakar variabilitet i tillväxten av tumörer implanterade i C57BL/6 möss?
PD: det finns många faktorer som kan påverka tillväxten av implanterade tumörer.,
även om samma antal celler implanteras (och de har samma lönsamhetsnivå) kan den exakta placeringen av transplantatet och efterföljande perfusion ha drastiska effekter på tumörtillväxten. Till exempel kan tumörtillväxthastigheten variera med en faktor på fyra beroende på om den implanteras mer anteriorly eller posteriorly7.
den exakta placeringen av subkutana transplantat bör övervägas och kontrolleras i studier. Djurets ålder och startvikt kan också påverka tumörtillväxten — jag rekommenderar att du beställer möss i vikt för att normalisera detta., Forskare bör också beställa möss från en enda plats för att minimera effekterna av mikrobiom skillnader.
slutligen är möss Socialt hierarkiska, och underordnade individer kan ha olika nivåer av stress som kan påverka immunsvar och tumörtillväxt. Miljöberikning och lämpliga acklimatiserings-och djurhållningsförhållanden (hantering, ljus, buller etc.) kan bidra till att minimera stress, särskilt hos män.,
Visa Taconic Biosciences” Webinar:
- den viktigaste musen i världen – din Guide till C57BL/6 mus
ladda ner Taconic Biosciences” vitt papper:Visa Taconic Biosciences ”Webinar: